关键词： 多发性硬化；白细胞介素6

【摘要】目的探讨白细胞介素6(IL-6)在多发性硬化(MS)发病中的作用。方法以生物学方法检测37例MS患者血清及脑脊液(CSF)中IL-6含量。结果MS患者血清及脑脊液中IL-6含量分别为72.67±52.46；17.50±5.21 U/ml而非炎症性神经病(NIND)组分别为19.74±13.81和5.56±2.25 U/ml，正常对照(NC)组血清IL-6含量为6.33±10.39 u/ml，MS患者血清及脑脊液IL-6水平均明显高于对照组(P＜0.01)，但MS患者血清与CSF IL-6水平不呈线性相关，血清IL-6水平随病情稳定而下降。结论IL-6参与MS的免疫病理过程。

The levels of interleukin-6 in patients with multiple sclerosis and their clinical significanceQi Qixue^*, Li Yufen, Dai Rujuan. ^*Laboratory of Department of Neurology, First Clinical College, China Medical University, Shenyang 110001

【Abstract】ObjectiveTo investigate the role of interleukin-6 (IL-6) in multiple sclerosis (MS).MethodsThe interleukin-6 levels in serum and cerebrospinal fluid(CSF) from 37 patients with MS were measured by using a sensitive bioassay.ResultsThe IL-6 in serum and CSF from patients with MS was 72.67±52.46, 17.50±5.72 U/ml respectively and from those with NIND 19.74±13.81 U/ml and 5.56±2.25 U/ml respectively and from those with NC 6.33±10.39 U/ml in serum. The IL-6 levels of serum and CSF in patients with MS were significantly higher than in controls (P＜0.01), but no relationship was observed in IL-6 levels between serum and CSF. The serum IL-6 levels were high at onset and fell down with stabilizing of patient′s condition.ConclusionIL-6 participates in immunopathological process of MS.

【Key words】Multiple sclerosisInterleukin-6

多发性硬化(MS)病因及发病机制至今未明，目前认为它是一种与中枢神经系统(CNS)髓鞘成分有关的自身免疫性疾病。近年来的研究表明，IL-6作为细胞因子网络的主要成分之一，参与许多自身免疫性疾病的发病过程^［1］。作者报道37例MS患者血清和脑脊液(CSF)IL-6水平检测结果，旨在进一步探讨白细胞IL-6在MS发病中的作用。

材料和方法

一、材料

检测对象：37例MS患者，其中男性26例，女性11例，年龄14～64岁，平均42.5±14.3岁，对照组为非炎症性神经病组(NIND)及正常对照组(NC)各20例。所有患者在测定IL-6之前未用免疫制剂、激素及换血疗法。

二、检测方法

1.标本采集：取静脉血5 ml，自然凝固后分离血清；待测血清56℃30分钟水浴灭活(去除补体活性)后-70℃冰箱内冻存；脑脊液离心后-70℃冰箱内冻存。

2.IL-6检测：小鼠杂交瘤细胞(日本大阪大学细胞工学中心惠赠)悬于Hank′s液中，1 000 r/min离心5分钟，弃上清，细胞以1640培养液调细胞浓度至8×10⁴/ml，加入96孔培养板中0.1 ml/孔；加入待测血清或脑脊液0.1 ml(连续2倍稀释)，37℃，5%CO₂培养48～60小时；加入MTT(噻唑蓝)10 μl(5 mg/ml)继续培养4小时。培养板离心后弃上清，加入DMSO(二甲基亚砜)0.2 ml/孔，混匀后酶标仪测570～630 nm处的吸光度(A)值；并设阴、阳性对照，阴性对照为1640培养液加入MH₆₀细胞，阳性对照为连续2倍稀释的T₂₄细胞上清，以T₂₄细胞上清50%反应率为1U，来确定各个样本的IL-6含量，最终结果以U/ml表示。

3.测定结果用x±s表示，并用t检验、相关分析法进行统计学分析。

结果

1.MS患者血清及CSF IL-6水平增高：MS、NIND及NC组血清IL-6水平分别为72.67±52.46，19.74±13.81和6.33±10.39 U/ml，前者显著高于后两者(P＜0.01)。而NIND组与NC两组间差异无显著意义(P＞0.05)。MS及NIND组CSF IL-6水平分别为17.50±5.21、5.56±2.25 1 U/ml，两者比较差异有显著意义(P＜0.01)(图1)。

图1血清及CSFIL-6水平

图2考的松治疗后MS患者血清IL-6水平的变化

直线相关分析结果显示MS患者血清与CSF IL-6水平(用激素前)不呈线性相关(r=0.31，P＞0.05)。

2.MS患者血清IL-6水平治疗后随病情稳定而下降：9例MS住院患者经肾上腺皮质激素治疗后，症状、体征均有不同程度的改善。血清IL-6水平逐次下降，约在治疗后一个月接近正常水平(图2)。

讨论

IL-6是由单核细胞、激活的T细胞及多种活性细胞分泌的一种具有广泛生物学活性的细胞因子，它参与调节机体的免疫反应，并在神经系统、造血系统及机体应激反应中发挥作用。其调控失常与多种炎症性及自身免疫性疾病有关。

本实验结果显示MS患者血清及CSF IL-6水平显著升高，与国外文献报道一致^［2，3］。而且其血清IL-6水平治疗后随着病情稳定而下降。提示IL-6可能与MS发病有关。

IL-6在免疫调节中主要作用是诱导T细胞分化及B细胞生长、分化和分泌免疫球蛋白(Ig)。研究表明活化的B淋巴细胞必须借助IL-6才能分泌IgG、IgM、IgA^［4］，IL-6缺乏大鼠急性相反应和Ig反应均受到严重影响^［5］。IL-6的单克隆抗体可抑制Ig分泌，抑制率可达80%，表明IL-6在体液免疫中起关键作用。IL-6分泌异常可使B细胞生长分化调节失常，在自身免疫性疾病中可导致针对自身抗原的抗体产生增加。已知90%的MS患者伴有鞘内IgG指数增高及单克隆IgG带的存在。据报道70%患者血清中出现单克隆带^［6］。这些变化可能都与IL-6的异常分泌有关。IL-6还可促进B细胞分化成Ig分泌细胞，从而产生组织损伤自身抗体，继而使局部浸润的巨噬细胞摄取结合于有髓纤维上的自身抗体及吞噬髓鞘导致MS病灶的形成^［7］。由于IL-6可使血管通透性增强，MS病灶局部炎症细胞的浸润可能也与IL-6分泌增多有关，两者可互为因果，使局部免疫反应增强，从而导致MS病理损害的进一步发展。由此推测，阻断IL-6的作用，可能有助于抑制MS的发展。

本实验结果显示MS患者血清与CSF IL-6水平不呈线性相关，与文献报告一致^［2，3］。这可能与血清和CSF样品采集时间不一致有关。

本实验动态观察了血清IL-6水平变化，结果显示随着激素治疗后病情的稳定，血清IL-6水平也明显下降。与Imamura^［8］研究结果一致。Kennedy等^［9］发现实验性变态反应性脑脊髓炎鼠CNS中IL-6 mRNA表达增高，其峰值出现在临床症状加重之前，症状稳定时则迅速下降，提示IL-6与EAE病情变化一致。但IL-6与MS病情之间的关系目前尚无肯定的结论。由于激素对IL-6的产生有抑制作用^［10］，因此经激素治疗后IL-6的下降究竟是疾病的自然过程，还是激素的抑制效应。还有待于进一步深入研究。

参考文献

1Matsuda T, Suematsu S, Kawano M, et al. IL-6/BSF-2 in normal and abnormol regulation of immune responses. Ann NY Acad Sci, 1989,577：446-449.

2Maimore D, Gregory S, Arnason B G W, et al. Cytokine level in the cerebrospinal fluid and serum of patients with multiple sclerosis. J Neuroimmunol, 1991,32：67-68.

3Shimada K, Koh CS, Yanagisawa N. Detection of interleukin-6 in serum and cerebrospinal fluid of patients with neuroimmunological diseases. Arerugi, 1993,48：934-936.

4Muraguchi A, Hirano T, Tang B, et al. The essential role of B cell stimulatory factor 2 (BSF.2/IL-6) for the terminal differentiation of B cells. J Exp Med, 1988,167：332-334.

5Kopf M, Lamers M, Bluethman H, et al. IL-6 deficient mice show immunologic abnormalities, Nature, 1994,376：339-342.

6Laurenzi MA, Mavra M, Kam-Hansen S, et al. Oligoclonal IgG and free light chains in multiple sclerosis demonstrated by thin-layer polyacrylamide gel isoelectric focusing and immunofixation. Ann Neurol, 1980,8：241-244.

7Prineas JW, Graham JS. Multiple sclerosis: capping of surface immunoglobulin G on macrophages engaged in myelin breakdown. Ann Neurol, 1981,10：149-152.

8Imamura K, Suzumura A, Hayashi F, et al. Cytokine production by peripheral blood monocyte