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浓度梯度法监测苛养菌对9种抗生素的耐药性

2022-07-29
来源:求医网
使用营养丰富的培养基和修改后的判断值,虽然纸片扩散法也可用于苛养菌的药物敏感试验;但是对于苛养菌,简易的纸片扩散法只能对常用抗生素作有限的分析。特别是近年来,美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)不再推荐用纸片扩散法测定阿莫西林/棒酸和氨苄青霉素/舒巴坦对流感嗜血杆菌的抗菌作用, 以及广谱头孢菌素对肺炎链球菌的抗菌作用, 其原因是纸片扩散法的结果会造成过多的解释错误。为此,我们选用了已逐渐被认可的浓度梯度法(Etest法)测定100株苛养对9种抗生素的最低抑菌浓度(MIC),来监测它们对抗生素的耐药性,指导临床用药。

一、材料和方法

1.菌株来源:从北京医院门诊1997年6月~1997年11月就诊病人分离的肺炎链球菌、无乳链球菌、流感嗜血杆菌和淋病奈瑟菌各25株,合计100株苛养菌。

2.菌株鉴定:经API和VITEK鉴定系统证实。

3.抗生素:9种抗生素的Etest试条分别是:氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、头孢克罗、头孢呋肟、头孢他啶、头孢曲松、环丙沙星、阿奇霉素、克拉霉素。

4.药敏培养基:肺炎链球菌和无乳链球菌使用含血的MH平皿,流感嗜血杆菌使用HTM平皿,淋病奈瑟菌使用GCHI平皿(瑞典AB Biodisk)。

5.方法:细菌经18~24小时培养后,配制成0.5个麦氏单位菌悬液,用无菌棉拭子均匀涂在150 mm的相应药敏平皿上,每个平皿贴Etest试条,肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和淋病奈瑟菌置于含5%~8%CO2的培养箱,无乳链球菌放在普通培养箱内,35℃培养16~18小时后读MIC值,结果输入WHONET4软件,按NCCLS判定(环丙沙星:S≤1,R≥4;头孢呋肟:S≤4,R≥32;阿齐霉素和克拉霉素:S≤2,R≥8;头孢曲松:S≤8,R≥64;其余4种为:S≤8,R≥32)。

二、结果和讨论

流感嗜血杆菌对头孢菌素, 加酶抑制剂的抗生素,环丙沙星的耐药率为0%,但对克拉霉素的耐药率高达96%,其MIC平均值为6.27 μg/ml,耐药程度属于中等。

无乳链球菌对环丙沙星耐药率为8%,克拉霉素为20%,阿齐霉素为60%,其余为0%。

在25株肺炎链球菌中,发现一株耐头孢他啶的肺炎链球菌,其MIC=32 μg/ml, 同时对其他抗生素的MIC值环丙沙星=3 μg/ml, 头孢曲松=0.5 μg/ml。此结果也显示该菌是一株对β-内酰胺酶抗生素的低耐药株, 其耐药机制可能是: 此耐药株的靶位点青霉素结合蛋白1a,2x,2b均为镶嵌结构, 而1a,2x的改变导致高耐三代头孢菌。这种多重耐药株的出现,将给临床治疗带来极大的困难。

同样,对于淋病奈瑟菌的治疗,目前青霉素和四环素不被推荐为首选抗生素,国外一般把广谱头孢菌素和新氟喹诺酮抗生素作为首选药物。本次试验结果显示,淋病奈瑟菌对广谱头孢菌素的耐药性0%,但对环丙沙星的耐药高达68%。1996年北京5家医院的耐药监测显示, 用纸片扩散法测得淋病奈瑟菌(41株)对环丙沙星的耐药率为96.3%。因此作者认为环丙沙星不能作为处理淋病奈瑟菌的首选抗生素,最好经过药敏试验后选用。造成淋病奈瑟菌对环丙沙星高耐的原因可能是:①环丙沙星的耐药主要是在淋病奈瑟菌染色体上DNA旋转酶基因点的突变所致,且具有种属特点(如:环丙沙星对大肠埃希菌的耐药特点); ②由于氟喹诺酮类药物价格低廉,在不同感染疾病中大量使用所致。

(收稿:1997-12-25修回:1998-03-24)