关键词： 荚膜组织胞浆菌；真菌病

【摘要】目的明确并检出引起组织胞浆菌病的病原菌荚膜组织胞浆菌(HC)。方法骨髓直接涂片镜检；骨髓组织接种于梅里埃双相培养基等培养基上，分别于25℃及35℃孵育，观察HC生长情况及菌落形态，并做涂片染色置显微镜下检查。结果HC为双相型真菌，25℃条件下为霉菌相，霉菌相镜检找到特征性齿轮状大分生孢子；35℃及动物体内为酵母相，涂片镜检可见酵母样孢子。结论组织胞浆菌病诊断的金标准是以患者体内分离出HC。

The culture and identification of capsulatumFeng guoqin, Wen Shunni, Wu Hui. Department of Analysis, Second Hospital of Hubei medical University, Wuhan 430071

【Abstract】ObjectiveTo detect the Histoplasma capsulatum (HC) which causes a capsulatum disease.MethodsThe bone marrow smears were detected by microscope directly. The bone marrow was inoculated in MLI ctc, and incubated at 25℃ and35℃. The growth of HC and bacterium forms of HC were inspected and the characteristics of hC′S smear were observed under microscope.ResultsHC was a kind of dimorphic fungi. It appeared to be mould at 25℃, yeast at 35℃ and in animal′s bodies. When it appeared to be mould, it was found to be characteristic denticle macroconidiumia under microscope.ConclusionThe perfect standard to diagnose capsulatum disease is to separate HC from the patients.

【Key words】HistoplasmosisMycoses

组织胞浆菌病是荚膜组织胞浆菌感染所致的深部真菌病，常经呼吸道传染，侵犯肺部引起急性肺损害，严重者可引起进行性全身播散，主要累及单核巨噬细胞系统，如骨髓、肝、脾等；也可出现其他临床症状及表现形式。有轻、有重，但播散型常预后严重。

荚膜组织胞浆菌病呈全球分布，但以南美为主。我国1955年发现的一例为归国华侨，近年有几例零星报道。我院于1997年确诊两例播散性荚膜组织胞浆菌病。这两例患者一直被误诊为黑热病，长期抗利什曼原虫治疗无效，致使一男性患者死亡，死后取其组织培养，并结合骨髓涂片，与另一女性患者涂片形态特点、生化反应均相同。该女性患者在濒死阶段转我院治疗，在确诊后行两性霉素B抗真菌治疗，约2个月即痊愈出院。组织胞浆菌病的确诊有赖于真菌培养，从体内分离出HC是诊断本病的金标准。

材料与方法

一、材料

1.标本来源：取患者骨髓；解剖取组织。

2.培养基：沙保罗培养基(SDAI)，玉米培养基(MDA)，脑心浸汁血培养基(BHIB)，梅里埃双相培养基(MLI)。其中SDAI及MDA为自制斜面，高层培养基(按传统配方)；脑心浸汁血培养基为进口半成品，取3.8 g溶于100 ml水中加热121℃高压15分钟，再冷却至56℃左右，后加入绵羊血5 ml，制成高层斜面。以上培养基均未加抗生素。MLI为进口成品。

二、方法

1.骨髓涂片：穿刺取骨髓少许，涂片、固定、瑞氏染色，显微镜下观察。

2.真菌培养：取骨髓、肝组织少许分别接种于MLI培养基内，在25℃中培养，待其生长后再移种于SDAI、MDA、BHIB及MLI内各2份，分别置于25℃和35℃两种温度环境孵育，观察各培养基在各不同时期的菌落形态及镜下菌体形态特点。

3.尿素酶试验。

结果

1.骨髓涂片：光镜下可见大单核细胞内大小一致的圆形或卵圆形芽生孢子，直径约2～4μm，孢子内胞浆多呈半月形并集中于孢子一端，孢子边缘有未染色区域似荚膜(实为细胞壁在染色过程中皱缩所致)。孢子一端稍尖，另一端稍圆，大多位于大单核细胞内，聚集成群，充满整个细胞的胞浆，也有的孢子位于细胞外(图1)。

2.真菌培养：(1)25℃培养特征：呈霉菌相。①菌落特征于SDAI、MDA上孵育2周左右开始生长，菌落呈典型白色棉花团样，直径约3～4 mm；于BHIB、MLI上，7～10天左右长出菌落，直径约2～3 mm，呈绒毛状或中央呈粉末状，正面初为白色，逐渐转成棕色，背面为棕色，并见菌丝向培养基内呈放射状生长。②镜下特点：可见菌丝和大、小分生孢子(图2)，菌丝分枝、分隔、细长，小分生孢子较多，直径2～4μm，圆形或梨形、壁光滑。大分生孢子相对少见，直径约10μm，圆形、壁厚。在SDAI、MDA培养基上4周左右可找到典型的、具有特征性的齿轮状大分生孢子(图3)。菌落形成的早期及晚期均不会有此典型形态出现。HBIB斜面上培养物经20天左右生长，镜下可见似玫瑰花结样大分生孢子，大孢子外有一空圈，空圈外围绕一圈小孢子，似玫瑰花结样。这种形态只能在HBIB斜面上才能生成，而齿轮状大分生孢子也只能在SDAI、MDA培养基上生长。(2)35℃培养基特征：呈酵母相。①菌落特征：MLI、BHIB上生长缓慢，4周后才见菌落生长，呈光滑、乳酪样酵母菌落，棕黄色，直径约3～4 mm。在SDAI、MDA上生长不良，甚至不生长。②镜下特点：可见大小均匀，直径3～5μm的卵圆形芽生孢子(图4)。固体培养基酵母相生长不良；液体培养基酵母相生长很好。涂片偶尔可见一根细小菌丝，其余均为酵母样孢子。

各种培养基经反复接种，效果一致(6～7次以上)。此菌菌落均不易乳化、不易挑取，感觉坚硬。

3.尿素酶试验：将HC接种到尿素酶培养基中，25℃条件下4天左右可出现弱阳性反应。

讨论

HC为双相型深部真菌，体外培养时间较长，通常需要2周左右。酵母相比霉菌相生长慢，且对培养基的营养要求高。特征性的齿轮状大分生孢子只能在SDAI、MDA培养基、25℃条件下形成。可能是营养较差有利于大分生孢子的形成。SDAI与MDA的作用基本一致。玫瑰花结样大分生孢子只能在HBIB培养基上形成。MLI培养基有利于骨髓的培养及霉菌相向酵母相转化。所以，SDAI、BHIB、MLI这3种培养基是目前检出HC的必需培养基。HC的鉴定主要依据以下几方面：①双相型真菌的霉菌相与酵母相的转化；②菌落特征与镜下形态；③HC在动物体内的细胞内感染；④尿素酶呈阳性反应。另外，骨髓涂片镜检也具有重大意义。骨髓涂片的正确报告，具有时间短、快速的特点(相对培养时间较长)，它可为患者的早期治疗提供依据，对抢救患者生命及节省医疗费用起重要作用。

HC在细胞内的形态与另一种双相型深部真菌马尔尼菲青霉菌(PM)的组织相相似，两者引起的疾病表现往往相同，故易混淆。两者鉴别的最可靠的方法是真菌培养。PM于25℃时为霉菌相，有典型帚状枝，产生红色色素并渗入培养基中；而HC在25℃时可见齿轮状大分生孢子，无色素产生，据此可以鉴别。

播散型组织胞浆菌病与黑热病的临床症状表现相似，且两者骨髓涂片的镜下病原体形态又大致相同，故常造成误诊，但利什曼原虫镜下可见染色深的棒状动物体，而HC没有，这是两者组织形态学上鉴别的重要特征。不过，最终鉴别仍需依靠真菌培养。这两例患者，无明显肺部损害，仅有发热，肝、脾肿大，全血减少等表现。由于一直被误诊为黑热病，久治无效，以至一名男性患者死亡。另一名女性患者在误诊数月，生命濒临死亡时转来我院，经确诊和对症治疗，痊愈出院。可见，真菌培养对组织胞浆菌病的诊断与鉴别十分重要。曾将本病误诊为黑热病、结核病等其他病例的原因，主要是由于组织胞浆菌病在国内尚未引起足够重视，对其在我国的发病及流行情况尚不明了，诊断方法与防治上亦缺乏经验，今后需加强对本病的研究。

组织胞浆菌病在目前尚无确切证据说明我国有地区性流行的趋势。我国1955年发现的一例是一归国华侨；近年虽有3例零星报道，但仍属罕见病例。我院1997年确诊的两例荚膜组织胞浆菌患者均非归侨。一患者为男性，26岁，工人，湖北咸宁市人；另一患者为女性，25岁，农民，湖北沙市市人。均无外出史。此两例荚膜组织胞浆菌骨髓形态、培养菌落及形态一致，证明此病系当地散在发生，与外界流入无关。因此，该病的流行情况尚待今后进一步探讨。

图1骨髓涂片瑞氏染色，可见大单核细胞内卵圆形孢子×1000图2霉菌相苏木素染色，可见菌丝及大，小分生孢子×1000图3霉菌相结晶紫染色，可见特征性齿轮状大分生孢子×1000图4酵母相结晶紫染色，可见大小均匀的孢子×1000

参考文献

1苗佳，谭明珍，雷秉均，等.组织胞浆菌一例.中华传染病杂志，1997，15：封三.

2万培，严庆汉，京超，等.原发性肺组织胞浆菌一例.中华结核和呼吸杂志，1994，17：232-232.

3王家俊编.临床真菌检验.上海：上海医科大学出版社，1995.195-198.

(收稿：1998-03-16修回：1998-05-15)