细菌学鉴定:
1.采样:发生食物中毒后当天下午,现场采集凉拌豆丝、食物残渣、呕吐物各1份,8例患者大便8份,事主家3头猪的粪便3份,送检。同时采取患者发病初期(1~3天内)和恢复期(发病30天后)的血清放冰箱储存。
2.分离培养:将标本分别接种亚硒酸盐增菌液和GN中,混浊生长后,接种HE、SS、麦康凯平板,37℃24小时培养,选可疑菌落接种克氏双糖培养基和动力、吲哚、尿素培养基,37℃24小时培养,结果均检出同一种细菌,在SS平板上为无色透明、光滑、稍扁平、菌落大小不一,中心带黑色;在HE平板上为蓝绿色,中心带黑色;在麦康凯平板上为无色、半透明菌落。菌形为革兰阴性杆菌。
3.生化反应:葡萄糖、甘露醇、木胶糖、山梨醇、阿拉伯糖、卫矛醇、H2S、甲基红、枸橼酸盐、赖氨酸等均为阳性;乳糖、蔗糖、靛基质、VP试验、尿素、苯丙氨酸、明胶、棉子糖等均为阴性。符合沙门菌反应。
4.血清学试验:分离菌株与O抗原A-F多价血清凝集;沙门菌因子血清O1、O4、O12凝集;O5不凝集;H1=i,H2=1,2凝集,盐水对照不凝集,查Kauffman-white抗原表,确证为鼠伤寒沙门菌哥本哈根变种血清型。
5.试管血清凝集试验:将分离菌(人源菌、猪源菌)分别制成7亿/ml的菌液与病人初期血清8份凝集,其效价均为1∶20;而恢复期血清8份凝集效价一份为1∶640,7份在1∶1 280~2 560之间。
6.抗生素敏感试验:用纸片扩散法。该菌株对吡哌酸、阿米卡星霉素、庆大霉素、氯霉素、卡那霉素敏感;对新霉素、痢特灵中敏;对头孢唑啉、磺胺、氨苄西林耐药。
讨论:经细菌学鉴定以及中毒者初期和恢复期的抗体滴度呈4倍增长,病人恢复期效价为1∶640~2 560,表明引起本次食物中毒的病原菌是鼠伤寒沙门菌哥本哈根变种1、4、12∶i∶1.2血清型。经病原学调查发现,户主将酒宴后的食物残渣喂饲3头猪,致使猪也发病,主要症状发热、腹泻。实验室从其3份猪粪中均检出本菌,表明该菌株产生肠毒素,是引起人畜共患的致病菌[1]。且在猪病后50天仍从猪粪中检出该菌,表明猪可成为长期带菌宿主,在防治中应采取有效措施。鼠伤寒沙门菌是一个种,有1、4、5、12∶i∶1.2;1、4、12∶i∶1.2;4、5、12∶i∶1.2;4、12∶i∶1.2四个血清型,因此,鉴定到血清型(即亚种),以准确确定鼠伤寒沙门菌引起食物中毒的流行株,对食物中毒处理与预防具有重要流行病学意义。
参考文献
1郁庆福.卫生微生物学.北京:人民卫生出版社,1995.94-98.
(收稿:1997-10-15修回:1998-03-25)
