血液中碳氧血红蛋白(HbCO)的含量测定，可为一氧化碳中毒急性期病人的诊断提供可靠的证据，也可作为接触一氧化碳的生物监测指标。我们从实践中感到双波长分光光度法更适用医疗单位。

一、原理和方法

1.血中的血红蛋白包括还原血红蛋白(Hb)、氧合血红蛋白(HbO₂)、碳氧血红蛋白(HbCO)及微量的变性血红蛋白(HbM)四种形式。在连二亚硫酸钠的还原作用下，HbO₂和HbM还原成Hb而HbCO无变化。因此，血液稀释液经还原就只有Hb和HbCO两种组分，分别取其最大吸收波长分光测定，可得出HbCO和Hb的吸光度比值［Q］，此值反映HbCO在血液中的比率(饱和率S%)，两者呈线性关系。

2.试剂：(1)pH 8.0磷酸盐缓冲液Na₂HPO₄*12H₂O(AR) 20.00 g，KH₂PO₄(AR) 0.50 g 溶于1升蒸馏水中。(2)10% C_8-12聚氧乙烯醚硫酸钠。(3)连二亚硫酸钠［Na₂S₂O₄(AR)］。(4)溶血试剂：(1)加(2)4～5滴加(3)0.20 g混匀，以(1)补足至100 ml。加塞、避光，用前配制。(5)20 g/L NaOH溶液。(6)纯CO：在装有分液漏斗和气体导出管的抽滤瓶内加入甲酸(AR)适量，缓缓自分液漏斗滴加浓硫酸(AR)，产生的CO经气体导出管导入装有20 g/L NaOH溶液的洗气瓶后制得纯CO气体。(7)5 g/L肝素溶液。

3.分析方法：标准系列制备(1)Hb与HbCO标准液的制备：取不吸烟近期无CO接触者的血2 ml(肝素抗凝)，置小烧杯内，振荡约10分钟，使之与空气充分混合，此时血中极微量的HbCO在充分接触空气中完全转化成HbO₂。用蒸馏水将血液稀释10倍作为基液。Hb液，取基液8.0 ml加溶血试剂至200 ml，加塞混匀。HbCO液将纯CO导入Hb液中至液体呈CO血特有的亮红色不变，即达饱和，密塞备用。此过程需数分钟，应在通风良好的通风橱内进行全部操作。(2)测Hb、HbCO的最大吸收峰：因所用分光光度计不同而异。(3)标准系列配制：取5 ml具塞玻璃试管48支(分A、B管)，A管8只分别加入HbCO液：0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0 ml，血液溶解试剂：5.0、4.5、4.0、3.5、3.0、2.0、1.0、0 ml，HbCO浓度分别为：0、10、20、30、40、60、80、100%；B管8只，分别加入Hb液：5.0、4.5、4.0、3.5、3.0、2.0、1.0、0 ml，血液溶解试剂：0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0 ml，Hb浓度分别为：100、90、80、70、60、40、20、0%。按顺序将A、B两管液体分别移入两具塞比色杯内紧贴于同一光程中，同时以两比色杯溶血试剂为参比读取A_HbCO和A_Hb值，计算Q值［A_HbCO/A_Hb］将三次平行结果进行统计学处理。以Q值为纵座标，HbCO的S%为横座标绘制标准曲线。标本随即分析：用Hb吸管吸取末稍血20 μl，迅速放入内盛5 ml溶血试剂的5 ml具塞试管中，用上清液反复将Hb管内血液洗净，勿起泡沫，立即加塞轻旋混匀，移入10 mm具塞比色杯内，以溶血试剂为参比分别测定A_HbCO和A_Hb值，计算Q值，从标准曲线中得出HbCO的S%值。采样运输保存法：取末稍血约80 μl放入已加有5 g/L肝素40 μl已自然干燥的0.5 ml具塞塑料管中，立即加塞旋转混匀，以防凝血，低温避光运送，4℃冰箱保存。应在四日内完成检测。

二、结果与讨论

对117例非CO接触者HbCO(S%)测定结果：不吸烟者5.8%±1.8%，吸烟者8.6%±2.9%；本法测定是根据HbCO与Hb的组分比例而与总血红蛋白含量无关，因此取血量和稀释倍数都不需很准确；制作标准曲线必须用新鲜血液，且仪器、试剂有变化时需重做标准曲线；HbCO接触空气有部分可变成HbO₂，光线和振动也可促进这种转化，因此全部操作宜迅速、避光、密塞、混匀时动作应缓慢；Na₂S₂O₄在空气中易分解失效，应避光保存，可以小瓶分装蜡封，放于棕色干燥器内备用；本方法灵敏度符合于CO急慢性吸收的临床和生物监测要求，是个易于操作、可靠，快速、实用的HbCO定量方法。

(收稿：1997-07-15修回：1997-11-19)