我们利用海藻糖(trehalose)研制出一种高稳定性的葡萄糖氧化酶-过氧化物酶二合酶试剂纸片。这种二合酶纸片稳定性高，在37℃条件下至少可稳定8个月以上，可在室温贮存与应用，适用于基层医院，经几十所县乡两级医院使用，效果良好，报告如下。

一、材料与方法

1.试剂：葡萄糖氧化酶(550滴定单位/ml，中科院微生物所发酵工程部)；辣根过氧化物酶(7250 U/mg，上海丽珠东风生化技术公司)；新华1号定性滤纸；海藻糖(中科院微生物所制备)。

2.二合酶液的配制：将葡萄糖氧化酶透析除盐，然后用聚乙二醇浓缩1倍，取0.45 ml，加1.05 ml的0.2 mol/L、pH6.8的Na₂HPO₄-柠檬酸缓冲液，加辣根过氧化物酶1.5 mg，海藻糖30 mg，溶解混匀。

3.二合酶纸片的制备：取新华1号定性滤纸用打孔器制成直径为6 mm的纸片，然后平铺在玻璃平皿中，将上述二合酶液均匀的浇注在纸片上，浸泡10分钟，将多余酶液吸出，在37℃温箱中干燥后，放入含干燥剂的棕色小瓶中密封，室温保存。每片二合酶纸片可吸10μl酶液，含葡萄糖氧化酶≥9 u，辣根过氧化物酶≥9 u。

二、实验与结果评价

1.方法：每片二合酶纸片中加酚显色剂(0.05 mol/L pH 7.0磷酸盐缓冲液含苯酚5.3 mmol/L、4-AAP0.25 mmol/L)1.5 ml，浸泡5分钟，混匀后应用，试剂与血清比例为150∶1，37℃水浴15分钟，505 nm比色。

2.与常规葡萄糖氧化酶(GOD)法的比较：用本方法和常规GOD法分别同时测定20例血清标本，血糖浓度范围为1.35～17.17 mmol/L，±s分别为7.43±3.92 mmol/L、7.42±3.93 mmol/L，经配对t检验处理，d±s_d=0.0185±0.065 9mmol/L，t=1.26，P＞0.20，两法无统计学差异。

3.线性范围：取2.78、5.55、11.10、16.65、22.20、27.75 mmol/L葡萄糖标准液测定，在ISP-Ⅱ型生化分析仪，505 nm滤光片，测得吸光度分别为0.125、0.248、0.492、0.746、0.992、1.248，结果表明，葡萄糖浓度在27.75 mmol/L以内与吸光度有良好的线性关系。

4.重复性试验：批内重复性，取高低两份不同葡萄糖含量的血清重复测定10次，±s分别为22.30±0.55 mmol/L、6.90±0.14 mmol/L，CV值分别为2.5%、2.0%；日间重复性，取2份血清分装后-20℃保存，每天测一次，共测10天，其±s分别为16.42±0.47 mmol/L、6.36±0.15 mmol/L，CV值分别为2.9%、2.3%。

5.回收试验：取一份葡萄糖含量为7.8 mmol/L的血清分别加入2.78、11.10 mmol/L的葡萄糖标准液，其回收率为99.1%、100.5%，平均回收率为99.8%。

6.稳定性观察：将含海藻糖的二合酶纸片放37℃温箱中在8个月内分别对同一批号质控血清(上海生物制品研究所，批号951001)和1份糖尿病患者血清标本(分装-20℃保存)测定8次(每隔一个月测定一次)，其±s分别为6.81±0.24 mmol/L，23.40±0.69 mmol/L，CV值分别为3.5%，3.0%；而未加海藻糖的二合酶纸片放37℃温箱中，一个月后，其测得值分别为6.54、11.52 mmol/L。二合酶纸片加酚显色剂溶解后，在室温至少可稳定4天。

(收稿：1997-10-20修回：1998-01-16)