一、材料与方法
1.菌株:1996年10月~1997年3月,从临床标本共分离嗜麦芽窄食单胞菌25株(同一病人只取第一次鉴定结果)。
2.方法:常规分离细菌,标本接种中国蓝平板和血平板,37℃培养18~24小时后,取单个菌落接种三糖铁、蛋白胨水,同时做革兰阴性菌纸片扩散法药敏试验,应包括亚胺培南,放37℃培养18~24小时后观察结果。
对三糖铁反应似非发酵菌者(均为产碱不产气),如氧化酶阴性(用药敏平板做)、动力阳性(取蛋白胨水观察)、亚胺培南耐药,即报告为嗜麦芽窄食单胞菌。
对鉴定为嗜麦芽窄食单胞菌者,再用VITEK NFC卡(非发酶菌鉴定卡)鉴定确认。
二、结果与讨论
我们用简易方法鉴定的25株嗜麦芽窄食单胞菌,经VITEK NFC鉴定也得出相同结果。说明所用几种鉴定指标对该菌具有很好的鉴别力,鉴定结果既准确又快速,可在48小时内出报告。
窄食单胞菌属中目前仅有一个种,即嗜麦芽窄食单胞菌。该菌在血平板上呈淡绿色(在接种基线密集处更明显),在MH平板上也是如此;在中国蓝平板上菌落凸起,但形态与其他非发酵菌较难区别。有些菌株在三糖铁斜面上可见棕色色素,容易被误认为是绿脓假单胞菌。氧化酶阴性可与常见的假单胞菌属、伯克霍尔德菌属、产碱杆菌属及黄杆菌属区别;动力阳性可与不动杆菌属区别。因此我们认为在初步确定为非发酵菌后,如氧化酶阴性、动力阳性可初步确定为嗜麦芽窄食单胞菌,结合该菌对亚胺培南耐药可使鉴定结果更加可靠。目前绿脓假单胞菌株也有对亚胺培南耐药,且有增加趋势,但氧化酶阳性可与本菌区别。我们对采用本法前报告的2株对亚胺培南敏感的嗜麦芽窄食单胞菌重新鉴定发现,一株为绿脓假单胞菌,另一株为黄杆菌属。由此可见细菌对某些抗生素的天然耐药或敏感特性,虽然不是鉴定细菌的主要指标,但可以帮助和确认鉴定结果。这一方法在常规细菌鉴定中早有应用,如新生霉素和杆菌肽分别用于葡萄球菌和溶血性链球菌的鉴定等。
栖稻黄色单胞菌(flavimonas oryzihabitans)和浅金黄单胞菌(chryseomonasluteola)也是氧化酶阴性、动力阳性,如与这2种菌鉴别可做DNA酶试验,这2种菌DNA酶阴性而嗜麦芽窄食单胞菌为阳性[2],另外这2种菌对多数抗菌药物敏感包括亚胺培南[4]。在实际工作中此2种菌及其他一些类似特性的菌在临床标本中很少见,如结合菌落形态、敏感性试验结果等与嗜麦芽窄食单胞菌区别并不困难。
目前尚无标准方法用于嗜麦芽窄食单胞菌的耐药性检测,美国临床实验室标准化委员会推荐用肉汤或琼脂稀释法,但无论哪种方法包括纸片扩散法均未见有对亚胺培南的敏感株[5]。这与该菌存在一种锌离子依赖β-内酰胺酶有关。我们所试25株菌中,分别用浓度梯度法(如Etest法)检测11株、VITEK GNS-F5检测10株(注:该仪器不推荐用其做嗜麦芽窄食单胞菌的药敏试验)、纸片扩散法检测9株,均未见有亚胺培南敏感株。在Etest法和纸片扩散法中未见任何抑菌环。
参考文献
1Palleroni NJ, Bradbury JF. Stenotro-phomonas, a new bacterial genus for Xanthomonas maltophilia (Hugh 1989) Swings et al. 1983. Int J Syst Bacteriol, 1993,43:606-609.
2von Graevenitz A. Acinetobacter, Alcaligenes, Moraxella, and other nonfermentative Gram-negative bacteria. In Murray PR(ed.) Manual of Clinical Microbiology, 6th ed. Washington DC: American Society for Microbiology, 1995.520-532.
3Dufresne J, Vezina G, Levesque RC. Coloning and expression of the imipenem-hydraysing β-Lactamase operon fro pseudomonas maltophilia in Escherichia coli. Antimicrob Agents Chemoother, 1988,32:819-826.
4Hawkins RE, Moriarty RA, Lewis DE, et al. Serious infections involving the CDC Group Ve bacteria Chryseomonas luteola and Flavimonas oryzihabitans. Rev Infect Dis, 1991,13:257-260.
5Pankuch GA, Jacobs MR, Rittenhouse SF, et al. Susceptibilities of 123 strains of Xanthomonas maltophilia to eight β-lactams (including β-lactam-β-lactamase inhibitor combinations) and Ciprofloxacin tested by five methods. Antimicrob Agents Chemother, 1994,38:2317-2322.
(收稿:1997-04-15修回:1997-10-29)
