一、材料与方法
1.试剂:万华公司“速而准”便潜血单克隆抗体法试剂盒(批号S01066);美国Stanbi
oLaboratory公司生产的Hema Screen试剂盒(愈创木酯法)(批号1290~100)。
2.方法:(1)用单克隆抗体法对5种浓度(0.2 μg/ml、2μg/ml、20μg/ml、200μ
g/ml、500μg/ml)的人和6种动物(羊、牛、火鸡、狗、鸽子、兔)的血红蛋白液进行检测。(2)用上述二种方法对食用9种动物肉类(猪、羊、牛、兔、鸡、鱼、鸭、虾、狗)血红蛋白各5例的便潜血进行检测。(3)用单克隆抗体法、愈创木酯法对100例临床常规便潜血检测病人粪便中的血红蛋白进行检测。
二、结果
1.用单克隆抗体法对5种浓度的人和6种动物的血红蛋白液进行检测,结果单克隆法潜血实验,可测出样本中微量的血红蛋白(0.2 μg/ml),这使得单克隆法对人体无症状的消化道微量出血更敏感。但动物血红蛋白各浓度检测结果均为阴性,间接说明了单克隆法潜血实验特异性强,敏感性强,不受食用肉类的干扰。
我们用愈创木酯法对不同浓度的人血红蛋白液进行实验,发现浓度在0.2~90μg/ml时均为阴性,当达到0.1 mg/ml时才阳性,也就是说它们对人体无症状的消化道微量出血不及单克隆法敏感。
2.用上述两种方法对食用9种动物(猪、羊、牛、兔、鸡、鱼、鸭、虾、狗)肉类各5例的便潜血进行检测,所得结果看出,食用动物肉类,对化学法(愈创木酯法)的便潜血实验结果影响很大,可使结果出现假阳性,而单克隆抗体法则不受影响。
3.用单克隆抗体法、愈创木酯法对100例临床常规便潜血检测患者粪便中的血红蛋白进行检测,所得结果:显示愈创木酯法阳性率比单克隆抗体法高30%。其中单克隆抗体法的14例患者与愈创木酯法均为阳性,经临床证实此14位患者为患有消化道出血、直肠癌、胃癌、肝癌、结肠炎、子宫癌转移、胃溃疡等疾病,而其中30例愈创木酯法阳性而单克隆抗体法阴性的病人经临床证实为食用过动物肉类或含过氧化物酶类蔬菜(如红萝卜、西红柿、波菜、韭菜、芹菜、油菜、木耳菜等)。此结果表明单克隆抗体法测定便潜血无假阳性,而愈创木酯法假阳性率高,占30%,所以临床应用单克隆抗体法检测便潜血具有较好的准确性。
三、讨论
胃肠道出血可由多种疾病引起,美国癌病协会估计早期诊断和及时治疗的情况下,每年死于此类病的人三分之二可挽救。Greegar认为,如果每年的常规体检中都同时作潜血实验,再加上一定数量的直肠检查和乙肠结肠镜检查,那么许多乙肠结肠癌在可治愈阶段可被检出。临床研究证实,粪便中带有癌肿的微量出血是早期结肠直肠癌唯一可以查出的异常现象,所以对粪便中微量血红蛋白的检出具有十分重要的意义。
1864年,Vandeen发明了愈创木脂法来检查便潜血。然而,此类方法检查便潜血存在许多干扰因素。我们的结果表明检测前三天病人不可食用的动物肉类,含过氧化物酶的新鲜蔬菜、铁剂、维生素C和某些药物。而且此法的灵敏度低,当粪便中血红蛋白含量达到500 mg/100 g粪便时,才可检测出。
近年来,人血红蛋白的单克隆抗体的制备,可应用各种免疫技术来特异性地检测粪便潜血。从我们的实验结果也可看出,单克隆抗体法仅特异性地针对人血红蛋白,其它动物肉类对此实验无干扰作用。含过氧化物酶的新鲜蔬菜,铁剂,维生素C及对化学法有干扰作用的某些药物对此法的结果均无影响。此法比愈创木酯法(化学方法)的灵敏度也要高很多,它可以检测出0.2 μg/ml的血红蛋白(0.03 mgHb/g粪便),也就是说,它可检测出粪便中微量的血红蛋白,如前所述,这对胃肠道出血性疾病的早期诊断是非常重要的。
(收稿:1996-12-18 修回:1997-08-03)
