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1对象与方法
1.1标本12例重度黄疸患儿,日龄3～15天。用婴儿一次性尿袋随机收集尿液5～10 ml待用。
1.2模板的制备取被检尿液1 ml 15 000 r/min离心15 min,弃上清用生理盐水混悬后再次离心15 min,弃上清,加裂解液20μl,石蜡油30 μl,离心片刻后直接在PE 480扩增仪上99℃ 15 min作为HCMV dNA模板。
1.3试剂PCR药盒及参考标准由华美公司成都分公司提供。操作及循环参数按说明书执行。扩增产物及阴、阳性对照,参考标准经琼脂糖(内含溴乙锭)同步进行电泳30 min,出现与参考分子量及阳性对照在151 bp处出现肉眼可见条带即判阳性。
2结果
12例尿液中1例与分子量标准及阳性对照在同一条位置上出现明显的荧光条带,即阳性。
3讨论
我们首次将该项技术引进高原地区,并通过对实验条件的反复探索,改变模板裂解方式,直接在PE480进行99℃裂解15 min,并在裂解前向反应管中多加一次石蜡进行覆盖,即起到了减少反应体系在高温作业中的气化现象,也起着保温作用。尿液1例阳性患儿病史长,黄疸消退时间延长,经针对性治疗效果显著,并与临床诊断相符。
(1998-08-05收稿,1998-11-16修回)
