摘要为了建立测定尿液中钴含量的化学方法。依据钴与2-(5-溴-2-吡啶偶氮)-5-(二乙氨基)苯酚及Triton x-100在pH5.2缓冲液中生成稳定的红色配合物，经12 mol/L硫酸酸化后，用分光光度计进行测定。本法具有较高的灵敏度[ε＝8.26×10⁴ l/(mol·cm)]和较好的选择性，最低检出浓度为3.8 μg/L，变异系数为4.6%。对于20 ml尿样，加入不同量钴0.2～0.4 μg，回收率为93.0%～102.5%之间，结果较为满意。

钴是人体必需的微量元素之一，研究证明，钴对铁的代谢，血红蛋白的合成，红细胞的发育成熟以及成熟血细胞的释放等，均有重要的生理功能。特别是钴作为维生素B₁₂的主要有效成份及其它钴化物的组成部分，发挥着高效能的生血作用。此外，钴还参与蛋白质的合成、叶酸的贮存、硫醇酶的活化以及骨髓磷脂的形成^［1］。人体及动物体内的钴主要由尿内排泄，因此，研究尿液中钴含量的测定方法，对于研究钴与人体健康的关系是十分必要的。

2-(5-溴-2-吡啶偶氮)-5-(二乙氨基)苯酚(5-Br-PADAP)属吡啶偶氮染料，对很多过渡金属离子都是一个较灵敏的显色剂^［2］。我们用该试剂作为显色剂，对尿液中钴含量的方法进行了测定，现报道如下。

1材料和方法

1.1试剂5-Br-PADAP(北京化工厂)：1.15×10^-3 mol/L乙醇溶液。钴标准溶液：用钴盐配成1 mg/ml标准储备液，使用时稀释成1μg/ml的标准使用液。NaH₂PO₄-Na₂HPO₄缓冲液：pH5.2。2%(V/V)Triton x-100水溶液。消化液：HNO₃:HClO₄＝4:1(V/V)。NH₂OH·HCl水溶液：1.44 mol/L。所有试剂均为AR级。

1.2试验方法

1.2.1尿液的消化留取24 h尿于洗净的尿液收集瓶中，取20 ml尿液于50 ml三角烧杯中，加9 ml消化液，置电热板上缓缓加热至白烟冒尽消失，残渣洁白为止。

1.2.2测定消化后的样品残渣加少量双蒸水溶解，用1 mol/L的NaOH调节至pH5左右，全部移入10 ml的容量瓶中，加pH 5.2的NaH₂PO₄-Na₃HPO₄缓冲液1 ml，加入10%的盐酸羟胺溶液2滴，摇匀后加入2% Triton X-100溶液0.6 ml和5-Br-PADAP 0.5 ml，再加入无水乙醇2 ml，摇匀，放置15 min。加0.8 ml 12 mol/L的H₂SO₄酸化，用双蒸水定容至10 ml，摇匀后静置15 min。用1 cm比色皿于波长590 nm以试剂空白作参比测定吸光度，通过标准曲线计算尿液中的钴含量。

2结果与讨论

2.1最佳实验条件选择

2.1.1缓冲液pH值的影响钴配合物在pH4.0～6.0时吸光度变化不大，在pH5.2时吸光度最大，本文取pH 5.2。

2.1.2显色剂用量的影响试验表明，当Co²⁺浓度为0.5μg/10 ml时，显色剂5-Br-PADAP用量以0.2～0.8 ml为好，本文取0.5 ml。

2.1.3配合物的稳定性试验显色后放置10 min，吸光度达到最大且稳定，酸化前其吸光度至少24 h内保持稳定；加入12 mol/L的H₂SO₄酸化后，10 min显色稳定，至少8 h内其吸光度不变。本文酸化前显色时间选用15 min，酸化后显色时间也选用15 min。

2.1.4非离子表面活性剂的影响加入非离子表面活性剂Triton x-100可作为增溶、增敏、增稳稳定剂^［3］，经试验取2% triton X-100 0.6 ml为宜。

2.1.5乙醇的影响试验表明，乙醇的加入能显著改变配合物的吸收光谱，使吸收峰变尖(见图1)。因此，乙醇的加入能提高测定钴的特异性。本文选用加入无水乙醇2 ml。

2.1.6干扰离子的影响及消除5-Br-PADAP试剂显色灵敏度高，但选择性较差，它几乎能与所有的过渡金属离子形成有色配合物。但在试验条件(pH5.2)下，仅能与Co²⁺、Cu²⁺、Ni²⁺、Fe²⁺产生定量反应^［4］。在加入12 mol/L H₂SO₄酸化后，28 μg的Cu²⁺、2 μg的Ni²⁺、50μg的Fe²⁺不干扰钴的测定，这是因为上述干扰离子与5-Br-PADAP形成的配合物在强酸性溶液中迅速分解，此时仅Co²⁺的配合物保持稳定不受影响。

2.1.7吸收曲线见图1，在以上的试验条件下，钴与5-Br-PADAP形成红色的配合物，于波长584～592 nm处吸光度最大，与文献^［5］一致。本文选用590 nm作为测量波长，在UV-210型紫外可见分光光度计(岛津)上测量。

图1配合物吸收曲线(以试剂空白为参比)

2.2标准曲线的绘制及灵敏度取7只10 ml的容量瓶，分别加入Co²⁺标准使用液(1 μg/ml)0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 ml，用本文选用的方法进行测定。

结果表明，钴含量在0.00～3.00 μg/10 ml范围内服从朗伯-比耳定律，其线性回归方程为：Y＝0.132X＋0.0083(Y为吸光度；X为浓度，单位μg/10 ml)，r＝0.99997，表观摩尔吸光系数ε₅₉₀＝8.26×10⁴L/(mol*cm)，最低检出浓度为3.8μg/L。

2.3重复性试验将一份混合尿样分为10份，按本法测定钴含量，得±s为10.4±0.48μg/L，批内CV为4.6%。

2.4回收试验取20 ml钴11.6 μg/L的尿样,分别加入0.2μg、0.3 μg、0.4 μg钴作为试验样本,与未加钴的空白尿样在相同条件下消化,然后测定钴的回收率分别为102.5%、98.7%、93%,平均回收率为98.1%。

2.5尿液中钴含量测定应用本法测定了38例男女健康大学生(男20，女18)尿液中的钴含量，男性为18.66±3.86μg/24 h，女性为16.23±3.02 μg/24 h。

(本文得到我院陈修玮副教授的指导，在此致谢!)

参考文献

[1]王夔.生命科学中的微量元素.下册.北京：中国计量出版社，1992，61～70

[2]马卫兴.5-Br-PADAP在分析化学中的应用进展.理化检验-化学分册，1994，30(3)：52

[3]徐亚萍.5-Br-PADAP胶束增溶光度法测定矿泉水及饮用水中微量钴.中国卫生检验杂志，1994，4(2)：88

[4]周天泽，谢永明，秦学敏，等.用电子计算技术处理有机试剂的多组分体系.化学试剂，1982，4(3)：182

[5]金伟.2-(5-溴-2-吡啶偶氮)-5-二乙氨基酚在光度分析应用中的新进展.理化检验-化学分册，1995，31(1)：53，

(1998-09-28收稿，1999-02-26修回)