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核仁组成区嗜银染色的脱色技术

2022-07-29
来源:求医网
核仁组成区(NOR)嗜银染色对肿瘤诊断和预后判断有非常重要的参考价值。这种染色方法国内外文献报道较多[1],但存在着嗜银染色后背景着色深及银沉淀问题。我们在采用Pawan[2]等的快速NOR嗜银染色法过程中,发现用H2O2冲洗嗜银染色的涂片能解决银沉淀及背景染色问题,经与未脱色的方法进行比较观察,证明这种方法确有核仁区着色清晰,且背景无颗粒沉着等优点。

1材料与方法

1.1标本来源我院血研室确诊的急性白血病31例,其中ALL 12例,ANLL 19例。血片和骨髓片染色观察。

1.2试剂固定液95%乙醇,染色液A液(2.94 mol/L AgNO3溶液):将5 g AgNO3溶于10 ml蒸馏水中,保存在棕色瓶中,存放于4℃。B液(2 g/dl明胶溶液):0.2 g明胶溶于10 ml甲酸中,存放于4℃。脱色液:取3% H2O2 10 ml,加等量蒸馏水混匀,使用后弃掉。0.1 g/dl中性红复染液。

1.3方法

1.3.1白血病髓片或血片在95%乙醇中固定5 min,水洗,晾干。

1.3.2将A、B液于临用前按2∶1混合后滴于玻片上覆盖血膜,避光30℃ 20 min,水洗晾干。

1.3.3用脱色液冲洗15 s,流水冲洗,晾干。

1.3.4用0.1 g/dl中性红复染20 min,水洗后晾干镜检。

2结果

骨髓片中,白血病细胞核内嗜银颗粒物呈黑色。见图1。白血病细胞胞浆染成淡灰红色,细胞核染成褐色,Ag-NOR5呈黑色,位于细胞核内。背景清晰。

图1白血病骨髓片核仁组成区嗜银染色(×1 000)

3讨论

Ag-NOR染色,未经脱色的方法易造成银沉淀及背景染色深,影响观察。过氧化氢对过多的可溶性银颗粒有氧化作用,用H2O2可将非嗜银细胞上的银颗粒脱去,而嗜银细胞不受影响。用流水可将溶解在玻片上的银冲洗掉。这种方法简便可靠,优于原法,可在临床上推广使用。

参考文献

1郝洪岭,郑师陵,梁晋金,等.白血病患者核仁组成区银染色的初步探讨.中华血液学杂志,1993,14(2)∶95

2Pawan K,Dhar M R,Kumar T,et al.A rapid silver staining and destaining technique for the nuclealus organizer region.Biatechnic and Histochemistry,1995,70(6)∶302

(1998-04-07收稿)