[中图分类号]R774.1+2[文献标识码]A
[文章编号]1008-1801(2000)03-0153-03
Experimental study of retinal detachment models
SUN Xiao-dong,ZHANG Xi,CHEN Rong-jia,et al.
(Department of Ophthalmology, Shangha i First People's Hospital, Shanghai Institute of Ophthalmology, Shanghai 200080)
Abstract:Objective: We tried to produce an experimental model for retinal detac hment (RD) to study the possible reasons for incomplete recovery of visual funct ion after retinal reattachment.Methods: Fourteen pigmented rabbits were divided into four experimental groups a nd two control groups. An RD model was produced by infusing 0.1% sodium hyaluron ate 0.2~0.3ml through a 27G microtubule between the neural retina and retinal pi gment epithelium under the microscope. Histomorphological observation was perfor med by light microscopy after completion of the experiment.Results: After completion of the experiment, RD occurred in 100% of the experime ntal rabbits. The RD area extended from 70 to 85% of the retina. There was no ob vious inflammation in any eye. RD was maintained from 4 to 6 days (average 5.2 d ays). RD eyes showed only a few inflamed cells in the vitreous under the microsc ope. One eye which seemed to have no RD under the ophthalmoscope 1 and 2 weeks a fter the experiment, showed a flat serous detachment under the microscope. All o ther eyes showed no inflammatory infiltration after retinal reattachment.Conclusion:The method of injecting sodium hyaluronate under the retina in rabbits to establish an RD model is convenient, practical and effecti ve.
Key words:rabbit; ret inal detachment; sodium hyaluronate; animal model
视网膜脱离(retinal detachment, RD)是严重的致盲性眼病。虽然 手术治愈率有了很大的提高,但术后视功能恢复不理想,引起的原因还有待于进一步研究 [1,2]。由于在人眼上很难获得合适的RD标本进行研究,故需通过建立动物模型的方 法进行研究。本研究尝试在兔眼上建立RD模型,为今后研究RD术后视功能损害的原因奠定基 础。
1材料和方法
1.1实验对象和方法健康成年灰兔14只,设为 实验组12只,正常对照组 1只,RD阳性对照组1只。体重2.2~2.7kg,平均2.4kg,雌雄兼有。实验 动物由上海生物制 品研究所提供。实验组分为4 组,每组3只,6只眼,双眼同时建立RD模型后,分别在观察1、 2、3、4周后取眼球。RD对照组,在建立RD模型后8小时取眼球。正常对照组在实验全部结束 时取眼球。术后采用直接眼底镜观察眼底视网膜情况。并进行病理组织学切片检查。
1.2RD模型建立术前2%阿托品眼药水扩瞳2次。实验时采用3%戊巴比妥钠(1ml /kg)兔耳缘静脉麻醉。缝线 固定上下直肌,沿角巩缘剪开下方球结膜,在前下方角巩缘后2mm处,用20G巩膜穿刺刀刺穿 巩 膜,显微镜下,伸入27G前房注射针(美国Beaver公司)。在赤道部视网膜上造孔,然后向 后极部,以平行于视网膜方向,在视网膜下缓慢推注少量浓度为0.1%的透明质酸钠(上海建 华 精细生物制品有限公司出品,规格5毫升/支),可见局部视网膜灰白色隆起,然后在视网膜 层 间向各个方向继续推注透明质酸钠0.2~0.3ml,显微镜下可见整个后极部视网膜灰白色隆 起,直到赤道部前。用8-0可吸收缝线缝合巩膜切口1针,结膜下注射庆大霉素1万单位。
1.3组织切片的制备在预定的实验观察期满后,采用耳缘静脉注射过量3% 戊巴比妥钠,即刻摘取眼球。左眼固定于眼球固定液(95%酒精,蒸馏水,40%福尔马林, 冰醋酸)。经酒精系列脱水后,浸蜡,切片,常规HE染色。日本Nikon YS2型光学显微镜观 察,日本Olympus B2光学显微镜下摄片。
2结果
2.1术中并发症术中2眼在视网膜上造孔时发生视网膜表面出血,1眼量少,1眼 出血量稍多,未进入玻璃体腔,平铺在视网膜表面,色鲜红,范围约5~6 PD,但2眼均继续 实验,直至术毕未见出血增多。4眼术中发生裂孔扩大。其他所有眼手术经过顺利。
2.2术后观察术后第1天观察实验组兔眼,除1眼结膜囊有少量黄白色分 泌 物外,其余眼结膜稍充血,所有眼角膜透明,前房清亮,晶状体透明,眼底可见玻璃体无混 浊,视网膜均有脱离,呈灰白色隆起3~4D,范围达75%~85%,裂孔可见约1~2PD, 最 大的1眼裂孔有4PD,裂孔均位于赤道部。结膜囊有少量分泌物的1眼,亦无眼内炎表现,予0 .3%氧氟沙星眼药水滴眼,庆大霉素4万单位/天,肌肉注射,2天后分泌物消失。另有2眼视 网 膜表面可见有出血,3天后基本吸收。所有模型眼RD维持4~6天,平均5.2天。1周后所有眼 视网膜在眼底镜下观察均已复位。
2.3病理组织学观察对照组视网膜组织结构排列整齐,形态正常,光感受器细 胞与色素上皮细胞紧密相连,Müller细胞框架纤维结构完整(图1)。
RD对照组光镜下可见2眼神经视网膜上皮层与色素上皮层分离。玻璃体内见少量炎症细 胞浸润和游离的色素上皮细胞(图2,3)。
实验组中1周组和2周组各有1眼光镜下局部有浆液性扁平RD,其中色素上皮游离、肥大、增 生,少量淋巴样细胞浸润(图4)。1眼色素上皮细胞有轻度增生。其余10眼光镜下视网膜均 已复位,未见明显炎症细胞浸润。复位3周后视网膜组织结构与正常对照组无明显差异(图5 )。
图1正常对照组(×10)
图2脱离的视网膜(×10)
图3玻璃体内的炎症细胞和RPE细胞(×40)
图4浆液性RD(×40)
图5复位3周的视网膜
3讨论
视网膜脱离模型可以建立在猴、猫、兔等动物上,方法多样[3~6],可以采用玻璃 体切割术切除部分玻璃体,然后在视网膜上造孔注入平衡液,或通过微管直接在视 网膜下注射自体液化玻璃体,或采用在视网膜下直接注射平衡盐液等方法造成RD。这些方法 各有利弊,通过玻璃体切割的方法能造成长达24周的RD,但由于去除了玻璃体,不完全符合 人眼的RD发生过程;注射自体玻璃体虽比较接近人眼的RD发生过程,但由于先取出玻璃体再 注射,对玻璃体扰动较大;注射平衡盐液方法简单,但维持1~2天,有时不能达到实验要求 。
本实验通过在兔眼视网膜下直接注射透明质酸钠的方法建立RD动物模型,比较符合人眼RD发 病过程,手术并发症少,方法简便实用。本实验采用兔作为实验动物,来源广泛,而且兔眼 在 RD发生后无需采用其他方法,待透明质酸钠吸收后视网膜可以自行复位。透明质酸钠作为介 质与玻璃体成分非常接近,一度曾作为玻璃体替代物在玻璃体手术中应用[7],对 视网膜几乎无毒性。本研究也发现只有3眼视网膜下有少量浆液性渗出,较少有炎症细胞浸 润,再次 证明透明质酸钠有较少的组织刺激性,可以最大限度地减少介质本身对视网膜的毒性作用。 而且透明质酸钠有一定的粘滞性,操作方便,还可以通过浓度的改变延长吸收的时间,
