摘要目的观察葛根素滴眼液对家兔高眼压模型的作用和测定房水中葛根素药物浓度。方法兔眼球结膜注射地塞米松形成慢性高眼压模型，兔耳缘静脉注射葡萄糖形成急性高眼压模型，先后滴用10g·L^-1葛根素滴眼液，观察其降低或抑制高眼压作用；兔眼滴用葛根素滴眼液后，定时抽取房水，用反相高效液相色谱法测定房水中药物浓度。结果10g·L^-1葛根素滴眼液能降低慢性高眼压兔的眼压；能抑制急性眼压升高；药物滴入兔眼后，能被眼组织吸收进入房水，其高峰浓度(C_max)为0.963mg·L^-1，高峰时间(t_max)为2.0h，半衰期(t_1/2β)为8.32h。结论10g·L^-1葛根素滴眼液通过滴眼用药，能降低地噻米松引起兔眼高压，并能抑制由快速注射葡萄糖引起的眼压升高；药物能被吸收进入房水中，半衰期为8.32h，为该药临床应用提供了依据。

Puerarin eyedrops:action of reducing intraocular pressure and the concentration in aqueous humor

YAN Han-Ying,ZHU Yan-Qin,WU Zheng-Hong,CHENguang-Xin

AbstractObjectiveTo test wether puerarin eyedrops could lower intraocular pressure (IOP)in animal models and evaluate the level of puerarin in aqueous humor after administration of its topical eyedrops in different times.MethodsChronic ocular hypertension was described previously by dexamethasone (0.5mg every other day for 3 weeks)injection into the bulbar subconjunctiva of superior corneal margin of rabbit eye; Acute ocular hypertension was induced by rapid intravenous injection of 50g·L^-1glucose 15mg·kg^-1.RP-HPLC-UV method was used in determination of the level of puerarin in aqueous humor.Results The potency of IOP hypertension in 10g·L^-1pueraringroup was nearly to that of 5g·L^-1 timolol,but the effective time maintained for 10g·L^-1 puerarin was longer than that for timolol;The IOP lowering ability of 10g·L^-1puerarin on acute ocular hypertension rabbit was nearly the same as with 5g·L^-1 timolol; The pharmackinetic parameters were as following:α=1.0h^-1,β=0.083h^-1,t_1/2α=0.69h;t_1/2β=8.32h,K_a=5.06h^-1,C_max=0.963mg·L^-1;AUC=5.16mg·h^-1.L^-1;t_max=2.0h.ConclusionThe 10g·L^-1puerarin eyedrops can decrease IOP hypertention induced by rapidly intravenous injection ofglucose and topical dexamethasone.RP-HPLC-UV method is simple and sensitive in the determination of puerarin in aqueous humor.

Key wordspuerarin;intraocular pressure;aqueous humor;ocular pharmackinetics

作者简介严汉英，男，1936年生，江苏靖江人，中共党员。1959年毕业于南京药学院药学系。现任江苏省药物研究所研究员，眼科药理研究中心主任，江苏省药品评审委员会委员，江苏省药理学会常委，中西医结合研究会微循环专业委员会委员，是有突出贡献、享受中华人民共和国国务院特殊津贴的科学家。60至80年代初主要参与抗血吸虫和疟原虫药物研究。没食子酸锑钠获1978年全国科学大会奖。吡喹酮获1985年国家科技进步二等奖。负责研制的吡喹酮缓释片为1993年国家科委和卫生部新技术、新成果推荐项目，获国家新药证书。负责的疟原虫红外期体外培养研究获江苏省科技进步二等奖。1985年～1986年留美期间，通过实验发现有些抗青光眼药物虽然能降低眼内压，但同时减少了眼血流供应，使主要视觉器官营养不良。论文发表后，引起国际上对已知抗青光眼药物的再评价。回国后建立了江苏省药物研究所眼科药理研究中心，参与研制成诺氟沙星滴眼液，获江苏省科技进步三等奖。环丙沙星滴眼液获无锡市科技进步二等奖。负责“八五”国家重点科技攻关项目，抗白内障新药-苄达赖氨酸的研制，1997年取得国家新药证书和试生产批文。至1997年底，在国内外刊物上发表学术论文80余篇，编写专著3本。现正在主编《眼科药理学和药物治疗》。Tel:025-3373325(H):025-6636347(O)葛根素(puerarin)为常用中药野葛pueraria labata (willd.) Ohwi (P.thunbergeriana S.et Z.) Benth.P.pseudohirsuta Tang et Wang和甘葛藤(粉葛) pueraria homsonii Benth 根中分离出来的有效成份^［1］，其化学名为4，7-二羟基-8-β-D葡萄糖基异黄酮。鉴于葛根素有β-受体阻断作用和多种药理活性，故将其配制成滴眼液，用家兔高眼压模型，研究其降眼压作用，并测定了局部滴药后不同时相房水中的药物浓度，为开发新药和临床用药提供依据。

1材料和方法

1.1实验材料

1.1.1试剂5g·L^-1和10g·L^-1葛根素滴眼液(江苏省药物研究所眼科药理研究中心配制)；5g·L^-1噻吗洛尔滴眼液(天津市胜利制药厂生产)；9g·L^-1生理盐水(南京小营制药厂生产)，50g·L^-1葡萄糖注射液(江苏省宜兴市制药厂生产)；葛根素对照品(中国药品生物制品鉴定所提供)；甲醇(AR，淮阴塑料制品厂精细化工所生产)，磷酸二氢钠和磷酸氢二钠均为南京化学试剂厂生产。

1.1.2动物健康成年新西兰白兔，体重2～3kg，雌雄均用，为江苏省药物研究所实验动物室提供，实验前均检查双外眼，测量眼压和观察眼底正常者采用并连续测定眼压3d，稳定者选用。

1.1.3仪器Schiotz眼压计(苏州医疗器械厂生产)，日本岛津LC-6A高效液相色谱仪，SPD-6AV紫外检测器 ，USA7125样品进样阀(定量管为20μL)，TGLC-18B冷冻高速离心机(江苏省太仓医疗器械厂生产)，AST486计算机。

1.2实验方法

1.2.1慢性高眼压模型的实验方法^［2］在已选用的兔眼角膜缘上方球结膜下注射地噻米松0.5mg，隔日1次，连续3wk，可形成慢性高眼压模型。然后，随机分成4组：第一组为9g·L^-1生理盐水；第二组为5g·L^-1噻吗洛尔滴眼液；第三组为5g·L^-1葛根素滴眼液；第四组为10g·L^-1葛根素滴眼液。在麻醉条件下(200g·L^-1乌拉坦，1.0g·kg^-1,iv)测量眼压，于滴药前和滴药后1、2、3、4、6、10、24h各测眼压1次，某小时内的降眼压值用△IOP表示；△IOP=(IOP)_t-(IOP)₀,式中(△IOP)_t为t时间内的眼压下降值，(IOP)_t为t时间内的眼压实测值，(IOP)₀为滴眼前的眼压实测值。

1.2.2急性高眼压模型的实验方法^［3］在已选用的兔耳缘静脉快速注射50g·L^-1葡萄糖(15mg·kg^-1)可形成急性高眼压模型。动物随机分为5组：第一组为5g·L^-1葛根素滴眼液；第二组为10g·L^-1葛根素滴眼液；第三组为5g·L^-1噻吗洛尔滴眼液；第四组为溶媒体对照组；第五组为50g·L^-1葡萄糖组。在麻醉条件下(200g·L^-1乌拉坦，1.0g·kg^-1,iv)测量眼压，先测正常值，再滴药。1h后，各组均注射50g·L^-1葡萄糖，于注射后5、10、20、40min再各测眼压1次。

1.2.3房水中药物浓度的测定

1.2.3.1给药及样品采集方法^［4］取44只家兔，随机分成0、0.5、1、2、3、4、6、8、10、16、24h等11个时间组，每一时间组是4只家兔(共8只眼)。给药时，将家兔固定在兔箱内，轻轻拉开下眼睑使与眼球成袋状。滴入10g·L^-1葛根素滴眼液50μL，再轻轻放开下眼睑，使药物不会很快溢出。给药后，全麻家兔(iv 1.0g·kg^-1,200g·L^-1乌拉坦)，分别从每眼抽取0.2mL房水，立即置于-10℃冰箱中冷冻保存。

1.2.3.2色谱条件色谱柱为Supersorb ODS C18 (4.6mm×250mm,5μm)；检测波长249nm;流速0.7mL·min^-1;柱温40℃；流动相为甲醇∶水∶磷酸缓冲液(0.1mol·L^-1,pH7.40)=11∶79∶10；走纸速度1mm·min^-1。图谱见图1。

Figure 1 High performance liquid chromatogram of puerarin 葛根素高效液相色谱图

a：Mobil phase 流动相；b：Puerarin(RS)dissolved with mobil phase 流动相溶解葛根素(对照)；c：Black aqueous humor 空白房水；d：Puerarin (RS)dissolved with blank aqueous humor 空白房水溶解葛根素 (对照)；e：Aqueous humor sample 房水样品；f：Aqueous humor sample and puerarin (RS) 房水样品和葛根素 (对<