【摘要】目的探讨人疱疹病毒6型（HHV-6）对EB病毒(EBV)复制的影响。方法用HHV-6感染Raji细胞和EBV转化的淋巴细胞（LCL），并用抗HHV-6单克隆抗体（MAb)作免疫萤光分析（IFA）确定HHV-6已感染这二种细胞。用抗EBV人血清作IFA观察EBV抗原表达。结果HHV-6感染Raji细胞后可见细胞病变效应（CPE）；而LCL未见CPE。这二种细胞株用抗HHV-6的MAb作IFA均检出HHV-6，而对照组未检出HHV-6；用抗EBV人血清作IFA，感染HHV-6的二种细胞中均检出EBV抗原。结论HHV-6促进了EBV抗原表达，并提示在鼻咽癌的发生中HHV-6和EBV可能起协同致病作用。

Study on the effect of human herpesvirus 6 on replication of Epstein-Barr virus Xia Qingsheng*,Meng Guangmin,Ai Yanhong, et al. *Qingdao Municipal Hospital, Qingdao 266011

【Abstract】ObjectiveTo examine the effect of human herpesvirus 6(HHV-6) on the replication of Epstein-Barr virus (EBV) in cell lines. Methods Both EBV-infected Raji cells and EBV- transformed lymphoblastoid cell lines (LCL) were infected with HHV-6. Immunofluoresence assay (IFA) with monoclonal antibodies (MAb) against HHV-6 was applied to confirm the infection of HHV-6 in the two cell lines. Expression of EBV antigen was examined by IFA using human anti-EBV serum. Results Following HHV-6 infection, cytopathic effects (CPE) were observed in Raji cells but not in LCL. HHV-6 were detected in both cell lines by IFA with anti-HHV-6 MAb, but not in controls. EBV antigens were detected by IFA with human serum against EBV in both HHV-6 infected cell lines. Conclusion Data in this study suggest that HHV-6 promotes the expression of EBV antigen and may contribute to the pathogenesis of nasopharyngeal carcinoma in cooperation with EBV.

【Key words】 Nasopharyngeal neoplasms Herpesvirus 6, human Herpesvirus 4, human Virus replication

肿瘤的病因是非常复杂的，一般认为肿瘤的形成是多种因素综合作用的结果。就肿瘤的病毒病因而言，似乎也不是单一种病毒作用的结果，很有可能有几种病毒协同作用。EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV ）与鼻咽癌的发生密切相关^［1］。近年来新发现的人疱疹病毒6型（human herpesvirus 6, HHV-6 ）对EBV的复制有促进作用^［2］。现报道用HHV-6感染Raji细胞和EB 病毒转化的淋巴细胞株（lymphoblastoid cell lines,LCL）的研究结果。

材料和方法

一、病毒株

HHV-6 GS株和我国分离的HHV-6代表病毒株CH-16株。

二、细胞

HSB-2细胞用于HHV-6 GS株增殖，脐带血淋巴细胞用于HHV-6 CH-16株增殖。采用含有EBV基因组的Raji细胞和被EBV转化的LCL，这两种细胞在未被上述病毒感染前，经含抗EBV 抗体的人血清和抗HHV-6单克隆抗体(monoclonal antibodies, MAb)作间接免疫萤光分析(immunofluore-sence assay, IFA), 确定无EBV和HHV-6 抗原表达。

三、抗体

抗HHV-6 GS株MAb由日本国大阪大学医学院微生物学系Koichi Yamanishi教授惠赠。抗HHV-6 CH-16 株MAb由中国医科院基础所微生物免疫室制备。鼻咽癌患者血清经B95-8 细胞涂片作IFA，为抗EBV抗体阳性，而用含有HHV-6 GS株的 HBS-2涂片作IFA，为抗HHV-6 MAb阴性的血清用于本研究。

四、方法

用HHV-6 GS株及HHV-6 CH-16株感染Raji细胞及LCL，将感染病毒的细胞及未感染病毒的细胞制作涂片。用抗HHV-6单克隆抗体及抗EBV抗体阳性的人血清，按常规方法^［1］作IFA，观察HHV-6感染情况及EBV 抗原表达情况。

结果

一、HHV-6感染Raji细胞的结果

用HHV-6 GS株和HHV-6 CH-16株病毒感染Raji细胞5～9天，可见到一些特征性细胞病变效应（cylopathic effect,CPE)，即一些折光性强、气球状大细胞。将感染上述病毒和未感染病毒的Raji细胞制成涂片，用抗 HHV-6 单克隆抗体作IFA，结果未感染病毒的Raji细胞无萤光反应（图1），而感染病毒的Raji细胞出现明显萤光反应（图2）。表明HHV-6 GS株和CH-16株均能感染Raji细胞。再将HHV-6感染和未感染的Raji细胞涂片，用抗EBV抗体阳性，而无HHV-6 抗体的6份人血清作IFA，检查EBV 抗原表达情况， 结果这6份人血清与未感染病毒的Raji细胞无萤光反应（图3）；而与感染病毒的Raji细胞出现明显萤光反应（图4)。并测定了抗EBV抗体效价。结果感染后第5天即可检查出EBV抗原表达，抗体效价分别为1∶20,1∶40。感染后第9天时，抗体效价略有增长，抗体效价分别为1∶40，1∶80。

二、HHV-6感染LCL的结果

用HHV-6 GS株及CH-16株感染LCL，7天后仅见个别大细胞，无明显CPE 。感染后10～12天，将感染HHV-6和未感染HHV-6的LCL制成涂片，用抗HHV-6单克隆抗体作IFA，结果未感染病毒的LCL涂片中无萤光反应，而感染病毒的LCL涂片中可见明显的萤光反应。表明HHV-6能感染LCL。 再将感染病毒和未感染病毒的LCL涂片，用抗EBV抗体阳性人血清作 IFA，检查EBV抗原表达，结果6份人血清与未感染病毒的LCL涂片无萤光反应，而感染病毒的LCL涂片到感染后第10 天才出现明显萤光反应。表明有EBV抗原表达，并测定了抗体的效价， 抗体效价分别为1∶20和1∶80。

讨论

已有许多研究表明EBV与鼻咽癌发生密切相关^［1］，但仍有一些问题有待进一步研究。最近国外文献报导，近年来新发现的HHV-6可感染带EBV基因组的细胞，并对EBV复制起促进作用^［2］。我们用HHV-6病毒感染带EB病毒基因组的Raji细胞及EBV转化的人LCL，研究结果表明HHV-6能感染这二种细胞，并促进了EBV抗原表达，提示HHV-6在鼻咽癌的发生中可能起某种协同致病作用。国外文献还有从鼻咽癌组织中检出HHV-6 DNA序列的报导^［3］。我们研究组已调查证实HHV-6 在中国也是一个普遍存在、传播很广泛的病毒^［4］，因此值得继续深入研究HHV-6 与鼻咽癌发生的关系。EBV和HHV-6同属疱疹病毒。疱疹病毒特点之一是原发感染后病毒以潜伏感染状态长期持续存在于人体内，在某些因素的作用下，潜伏病毒可以再激活。而对病毒再激活的机理目前知之甚少。最近人们注意到病毒间相互作用是潜伏病毒被激活的机理之一。最近文献报导，人疱疹病毒7型（HHV-7）可以使潜伏感染的HHV-6再激活^［5］。本研究也证实，HHV-6可使潜伏状态的EBV基因组激活。这在探索许多疾病的病因方面有十分重要的意义。此外，国外文献称，HHV-6 A亚型有激活EBV复制的作用，但HHV-6 B亚型无此作用^［6］。中国分离的HHV-6 CH-16病毒株已鉴定为HHV-6 B亚型，本研究证实也有激活EBV复制的作用，值得引起注意。

在病毒学和临床应用诊断的实际工作中，以往是用药物，如促癌物TPA处理Raji细胞激活EBV抗原表达，用于测定鼻咽癌患者血清中EB 病毒抗原作鼻咽癌的早期诊断。本研究表明可用HHV-6代替TPA激活EBV抗原表达，此时Raji细胞或LCL，既有EBV抗原，又有HHV-6抗原，可用这种“双抗原”细胞涂片来测定鼻咽癌患者血清中的抗体，早期诊断鼻咽癌，并监测病情进展及预后。

1将未感染病毒的Raji细胞制成涂片，用搞HHV-6单克隆搞体作IFA染色，结果未感染病毒的Raji细胞无萤光反应。IFA染色×200（下同）图2感染HHV-6 GS株和我国分离的HHV-6 CH-16株病毒的Raji细胞出现明显萤光反应图3抗EBV抗体阳性，而无HHV-6抗体的血清与未感染病毒的Raji细胞无萤光反应图4后来居上感染病毒的Raji细胞出现明显萤光反应

参考文献

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