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1材料与方法
1.1实验动物
Sprague Dawley(SD)大鼠5只，2周龄，雌雄兼用，由上海医科大学实验动物中心提供。
1.2人工外淋巴液配方(mmol/L)
A液：NaCl 142，KCl 5.4，CaCl2 1.3，MgSO4 0.9，HEPES 5.0，Glucose 5.0，1 N NaOH调pH 7.4，4 N NaCl调渗透压300 mOs/L。B液：A液去掉CaCl2、MgSO4。C液：B液加木瓜蛋白酶配成0.25 g/L酶液。
1.3实验方法
动物断头后，在A液中取除听泡，剥去骨性蜗壳，取出完整基底膜，此步需在15 min以内完成。将基底膜在37℃ C液中消化30 min；A液漂洗3次，移入预滴A液30 μl之玻片上，在解剖镜下用自制钢针沿基底膜纵轴剥离出毛细胞,去掉残余组织屑后移置相差显微镜下观察，证实至少有100个以上形态、活性良好的毛细胞。活性判断标准按苏振伦等报道。然后将上述含毛细胞的30 μl A液用微吸管全部移至预涂有明胶的1.2 cm×0.6 cm的清洁厚型盖玻片上，静置30 min再移镜下观察细胞数目(至少100个以上)，且紧贴玻片上。自然风干至玻片湿润为度，立即轻移入2.5%戊二醛中固定4 h以上，锇酸后固定，PBS漂洗，临界点干燥，喷金，S-520型扫描电镜扫描。
2结果
每只SD鼠共2只耳蜗，经制成扫描标本后仅能观察到10个左右形态完整的毛细胞。内毛细胞呈椭圆立体状，颈部很短，约为体部直径的二分之一，表皮板呈板块状，其边缘超过细胞颈部，类似于盖状，顶部见排列阶梯状的数排静纤毛，胞体表面有细小颗粒状突起。外毛细胞柱状，其表皮板厚，斜位，略向外凸，纤毛清楚，胞体表面也有高低不平细小突起。此外尚可见其它如指细胞、柱细胞等。利用扫描标本，较容易测细胞长度、直径，由于所获毛细胞扫描标本少，本实验未测其大小(图1，2)。
图1单个内毛细胞扫描电镜观察
图2单个外毛细胞扫描电镜观察
3讨论
为了成功地制作出单个毛细胞扫描标本，应注意以下几点：①必须足够多地分离出形态良好的单个毛细胞，每份标本至少要有100个以上单个毛细胞，否则经多次处理后很难找到毛细胞。②分离毛细胞的溶液应尽量少，将含有毛细胞的溶液全部移至涂有生物胶的玻片上。本实验仅用30 μl A液，如溶液过多，就必然降低毛细胞密度。由于扫描标本所用玻片小，一般为0.5 cm×0.6 cm，故溶液过多也无法置留于这么小的玻片上。③将细胞移至生物胶玻片上后，至少应静置30 min以上，以便让毛细胞下沉贴附于粘胶上。在将毛细胞移至此玻片过程中也会丢失相当部分毛细胞。④宜自然风干标本，若留较多溶液，则在放入2.5%戊二醛时一方面会稀释固定液，另方面可能有部分毛细胞悬浮在溶液中，当放入固定液时会立即被冲走。但务必保持玻片湿润；过度风干细胞失去水分会皱缩，形态改变，甚至坏死。⑤每一处理过程都切忌抖动、冲洗标本，操作必须轻柔。因为每经一步骤，都会丢失一部分毛细胞。
(收稿 1999-08-30)
