关键词： 鼻肿瘤；内翻性乳头状瘤；血管内皮生长因子；胎肝激酶受体

摘要：目的：明确血管内皮生长因子(VEGF)及其受体在鼻内翻性乳头状瘤(NIP)组织中的表达，探讨其在NIP发病中的作用。方法：采用免疫组化SP法，对11例NIP标本及6例慢性单纯性鼻炎患者的下鼻甲标本，检测VEGF及其胎肝激酶受体(flk-1)，以图像分析仪半定量测定VEGF和flk-1的表达强度。结果：VEGF在NIP的上皮细胞和血管内皮细胞的表达，均显著高于下鼻甲组织相应部位(均P＜0.01)。flk-1在NIP血管内皮细胞的表达显著高于下鼻甲组织相应部位(P＜0.001)。flk-1表达于NIP上皮细胞而未见于下鼻甲上皮。结论：VEGF参与了NIP的病理过程，表现为部分NIP组织富含血管，手术时易出血。VEGF的较高水平表达，可能在间质水肿的发生过程中亦发挥了重要作用。NIP上皮细胞VEGF的表达水平有可能作为衡量NIP恶变的指标之一。

The significance and expression of vascular en dothelial growth factor on nasal inverted papillomas

HAN Fu-junWANG Yi-pengYANG Ji-hong

GUAN Gui-meiDONG ZhenYANG Zhan-quan

(Department of ENT,Head and Neck Surgery,the Third Affilliated

College of Bethune Medical University,Changchun 130031)

Abstract：Objective：To determine the expression of vas cular endothelial growth factor (VEGF) and its receptor in nasal inverted papil lomas (NIP) and to clarify the function of VEGF in the establishment of NIPs.Method：VEGF and its receptor,fetal liver kinase-1 (flk- 1) expression were exam ined by immunohistochemistry using SP method in sections of NIPs from 11 patients and inferior turbinates from 6 patients with chronic s imple rhinitis.An automatic image analyzer was used to detect the staining resul ts.Gray scale,a half-quantitative parameter,was used to describe the expression of VEGF and flk-1.Result：It whowed that all the epithel ium in NIPs,together with vascular and stroma adjacent to the epithelium,express ed different degree of VEGF.The VEGF expression in epithelium was significantly stronger in NIPs than that in inferior turbinates (P＜0.001).The expre ssions of both VEGF and flk-1 in vascular endothelium were more intense in NIP s than that in inferior turbinates (P＜0.001，P＜0.001).Flk-1 positive expression was observed in epithilum of NIPs but not in inferior turbin ates.Conclusion：The results suggest that VEGF participate in the growth of NIPs,part of which shows the characteristics of containing ple nty of blood vessels and being bloody in operation.The enhanced expression of VE GF may also play a key role in the development of edematous stroma.The expressi on degree of VEGF in the epithelium may be identified as one of the parameters of judging the propensity of NIPs′ malignant transformation.

Key words：Nose neoplasmsInverted papillomaVascular en dothelial growth factorFetal liver kinase-1▲

鼻内翻性乳头状瘤(NIP)是一种破坏力强、复发率高、外观似息肉的交界性肿瘤。随着对肿瘤研究的深入，人们发现血管生成是肿瘤浸润生长的先决条件^〔1〕。VEGF诱导血管生成的作用强、特异性高，而且增加血管通透性^〔2〕，在许多肿瘤的发病过程中发挥了重要作用^〔3〕，许多恶性转化的细胞都有过度表达VEGF^〔4〕。据此，我们观察VEGF及其受体在NIP组织中的表达，借以探讨其在NIP发病中的作用。

1材料和方法

1.1材料来源

11例NIP标本来源于1995～1998年手术切除或活检标本，术前未行任何治疗。11例NIP患者，男7例，女4例；年龄45～75岁。此外，6例为慢性单纯性鼻炎下鼻甲部分切除的组织，作阴性对照。2例为剖宫产的新鲜胎盘 组织。因胎盘组织高度表达VEGF及其受体，故选其为阳性对照。

兔抗人VEGF和flk-1多克隆抗体为美国Santa Graz公司产品。SP试剂盒(包括生物素标记的兔IgG和链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶，HRP)来源于美国ZYMED公司。

1.2检测方法

将NIP、下鼻甲及胎盘组织以中性36%甲醛固定，石蜡包埋，连续切片5μm厚。每个标本切片4张，分别用于VEGF、flk-1阴性对照和HE染色。玻片60℃2h烘干，脱蜡至水，3%过氧化氢溶液去底物，枸橼酸盐缓冲液抗原修复，10%羊血清封闭。加入1∶50稀释的一抗，4℃过夜；冲洗后加入1∶100稀释的二抗，37℃孵育40min；冲洗后加入1∶100稀释的三抗，37℃孵育40min。DAB显色，苏木精复染。梯度乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。阴性对照以PBS代替一抗。

应用日本Luzex-F型图像分析仪，电压设为6.5V，在1000倍镜下，对行VEGF染色的切片每张随机选取5个视野的上皮组织和相邻的细胞间质。因NIP病理组织学变化多样，同一肿瘤的不同部位上皮类型不一致，细胞间质形态也不完全相同。为增加研究的可比性，在行flk-1染色的连续切片中，选取的视野与VEGF染色中选取的视野相同。测定各视野中的上皮细胞、血管内皮细胞和背景的平均灰度，结果用待测物和背景的灰度差值表示。

1.3统计方法

采用SAS6.02软件，t检验和Pearson相关分析。

2结果

VEGF及flk-1阳性染色为棕黄色或棕褐色。胎盘血管内皮细胞的两种染色均呈阳性反应。阴性对照标本不着色。VEGF染色中邻近NIP上皮和血管的细胞间质，呈棕黄、棕褐色染色的基质成分呈带状分布。NIP全部上皮VEGF染色呈阳性反应。同一标本中各种上皮间灰度值无显著性差异，复层上皮的全层染色均匀一致，在间质水肿显著或含丰富血管的NIP组织中阳性反应程度重(图1)，平均灰度值为49.81±10.16；下鼻甲标本VEGF染色呈阳性反应的上皮细胞点状或片状分布于上皮组织内(图2)，平均灰度值为18.42±7.32；二者之间差异显著(P＜0.01)。NIP上皮组织中flk-1染色阳性细胞呈连续或片状分布(图3)，平均灰度值为29.47±8.40。下鼻甲标本上皮组织中未见flk-1阳性反应细胞。

图1鼻内翻性乳头状瘤组织中血管内皮生长因子表达；

图2下鼻甲组织中血管内皮生长因子表达；

图3鼻内翻性乳头状瘤组织中胎肝激酶受体表达；

NIP及下鼻甲标本中血管内皮细胞的VEGF及flk-1染色均呈阳性反应(图1，3)，平均灰度值分别为28.17±6.22和19.50±5.83，分别显著高于下鼻甲组织的7.56±2.11和6.23±2.62(均P＜0.01)。

NIP中上皮细胞VEGF的灰度值与内皮细胞VEGF和flk-1的灰度值分别呈正相关(r值分别为0.897，0.837；均P＜0.01)，表明随着上皮细胞VEGF表达的增加，内皮细胞表达VEGF和flk-1也增加。

NIP和下鼻甲标本的细胞间质中，散在分布两种染色都呈阳性反应的浆细胞样细胞和粒细胞样细胞(图4)。

图4鼻内翻性乳头状瘤组织中浆细胞样细胞血管内皮生长因子表达

3讨论

目前研究认为，VEGF不仅表达于多种恶性肿瘤细胞，而且其邻近的间质中的血管、少量间质细胞和基质都有不同程度的表达。肿瘤组织中VEGF主要由瘤细胞分泌。本研究发现，NIP组织中，VEGF主要表达于上皮组织和相邻细胞间质中的血管，浆细胞样细胞、粒细胞样细胞和基质也有不同程度的表达。因此推测，类似其他恶性肿瘤，VEGF主要由NIP上皮细胞合成，分泌入细胞间质后发挥生物活性。

VEGF可诱导内皮细胞分裂和促进血管通透性升高。本文资料表明，VEGF在NIP上皮细胞的表达强度显著高于下鼻甲，NIP组织中上皮细胞VEGF的表达与内皮细胞的VEGF和flk-1表达均呈正相关，在间质水肿显著或含丰富血管的NIP中阳性反应程度重，表明NIP中血管的构建和通透性受VEGF调控程度较下鼻甲重，且随表达的增加，VEGF对血管功能的调控水平相应提高。NIP中上皮细胞的VEGF表达和附近内皮细胞flk-1的表达呈正相关，而且局限于上皮细胞附近的内皮细胞表达flk-1。在人类结肠癌和神经胶质细胞瘤中flk-1的表达也