有关喉内淋巴管分布和吻合的研究报道较多，但尚有争议。酶组织化学染色法研究淋巴管细微分布比淋巴管间接注射法更客观，但应用该法研究喉内淋巴管分布的报道甚少。本文采用该法对喉内不同部位淋巴管细微分布进行观察。

1材料与方法

1.1材料来源

对23例一侧喉腔未受肿瘤侵犯假声带、喉室、声带、声门下区、声带与声门上下区交界处组织，从前往后分段作冠状位连续冰冻切片；前连合部作横断位连续切片；切片厚度为6～10 μm。会厌前间隙组织切片厚度为10～12 μm。

1.2染色方法

冰冻切片阴干后置于孵育液内，37℃孵育30 min，蒸馏水洗后放入1%硫化铵液内1 min，水洗后再入苏木精内孵育30 s，水化5 s。孵育液含有：0.2 mol/L三氨基甲烷-顺丁烯二酸缓冲液20 ml(pH7.2)，腺苷-5-磷酸钠20 mg，0.2 mol/L硫酸镁5 ml，蔗糖3 g，2%硝酸铅3 ml，左旋咪唑30 mg，蒸溜水22 ml。

2结果

切片经染色后，淋巴管和毛细淋巴管呈棕色或棕褐色，而血管则不显色。此切片再经苏木精复染后，淋巴管呈棕褐色或棕黑色，细胞核成浅蓝色或蓝褐色。从形态上看，淋巴管管壁不规则，有较多皱褶；很多淋巴管塌陷，管腔呈缝隙状甚至部分消失；毛细淋巴管呈棕色、弯曲条状，长短不一，走向不规则。

室带和喉室壁组织结构相似，在粘膜层、粘膜下层内可见大量棕色毛细淋巴管和淋巴管(图1)。毛细淋巴管主要分布在粘膜层，淋巴管主要分布在粘膜下层。会厌喉面粘膜淋巴管分布同室带和喉室，也十分丰富，但会厌前间隙内毛细淋巴管和淋巴管十分稀少。声门下区淋巴管的分布方式基本上同声门上区，但淋巴管密度较声门上区低。

图1室带假复层纤毛柱状上皮下毛细淋巴管或淋巴管

声带毛细淋巴管十分稀少，分布很分散(图2)；淋巴管则更少见，几乎都呈塌陷状况。毛细淋巴管和淋巴管主要分布在复层鳞状上皮与声韧带之间，还分布在声韧带和肌层内。前连合腱内同样存在毛细淋巴管和淋巴管。声带淋巴管分布密度较声门上、下区低得多。

图2声带复层鳞状上皮下毛细淋巴管

复层鳞状上皮和假复层纤毛柱状上皮交界处即移行区内存在毛细淋巴管或淋巴管，但很稀少；过移行区后，毛细淋巴管和淋巴管渐增多。

前连合腱交角融合处复层鳞状上皮下及前连合腱内存在毛细淋巴管或淋巴管(图3)，但并不丰富。

图3前连合腱交角会合处毛细淋巴管

喉内各部淋巴管定量分析：于假声带、喉室、声带和声门下区中段染色切片中随机抽取切片各10张，对切片中淋巴管密度较丰富的2～3个连续视野(10×20)进行照相，用测微计计算照片中单位面积内棕色条状毛细淋巴管长度。喉内各部单位面积内淋巴管长度分布是：假声带长度为(12.43±2.94)mm/cm²，喉室(13.51±3.41)mm/cm²，声带(2.82±1.11)mm/cm²，声门下区(6.88±1.29)mm/cm²。经t检验，假声带与喉室之间无显著性差异(P＞0.05)，但声带与假声带、喉室和声门下区间差异有显著性意义(P＜0.001)；声门下区与假声带、喉室和声带间差异亦有显著性意义(P＜0.001)。

3讨论

在淋巴管形态学形究中，如何区分淋巴管和血管至关重要。酶组织化学染色法不仅可显示开放状态的毛细淋巴管，还能显示未开放状态、淋巴管间接注射法无法显示的毛细淋巴管和塌陷后没有管腔的淋巴管。本文在前人研究基础上进行新的探索，对淋巴管染色后的切片再行苏木精复染，可同时观察淋巴管细微分布和喉粘膜不同上皮来源。

淋巴管间接注射法研究发现毛细淋巴管主要分布在粘膜层，淋巴管主要分布在粘膜下层。声门上区的淋巴管系统最丰富，声门下区次之，声带的淋巴管最少。本文酶组织化学法的观察结果与上述结论相一致，并首次对淋巴管分布进行定量分析，从统计学上证实声门上区、声带和声门下区淋巴管分布的差异性。

会厌前间隙淋巴管分布的研究报道甚少，林志宏等(1990)报道室带和会厌喉面淋巴管与会厌前间隙淋巴管有联系。我们研究发现，会厌前间隙内存在淋巴管，但并不丰富。

淋巴管间接注射法对声带淋巴管分布的研究结果差异较大，普遍认为声带同时存在毛细淋巴管和淋巴管，但Skarzynska等观察发现，声带只有淋巴管或毛细淋巴管。本文观察结果与Werner(1990)的研究结果相同，声带既有毛细淋巴管，又有淋巴管，除分布于复层鳞状上皮下以外，还分布在声韧带和肌层内。由此可见，酶组织化学染色法较传统的淋巴管间接注射法更能准确显示淋巴管分布。

有关喉内各部淋巴管吻合的争论较多，人们通常把喉内淋巴管分成四部，即声门上部、声门下部和左右声带。Beck等(1980)认为，喉内各部之间淋巴管存在吻合，但林志宏等(1980)认为，四部之间淋巴管无交通。这种研究结果差异与淋巴管间接注射方法本身有关，因为声带组织致密，淋巴管网稀少，间接注射时墨汁或普鲁蓝氯仿在声带内不容易扩散，声带的淋巴管难以被显示，所以普鲁蓝氯仿不能从声门上下区进入声带，或从一侧声带前端进入另一侧声带前端，并不能排除它们之间淋巴管交通的存在。本文采用酶组织化学染色法证实喉内各部交界处存在淋巴管，所以声带的淋巴管并非孤立。

通常把喉内各部淋巴管无吻合作为喉部分切除的参考。但淋巴管的界限并不是喉癌切除术式选择的唯一的因素，尚有喉内各部微血管分布差异和喉内解剖屏障等因素。尽管喉内各部之间淋巴管存在吻合，但并不丰富，所以并不影响喉内淋巴管已有的分区和喉癌切除术式的选择。■

(收稿 1999-05-10)