关键词： 骨质疏松；大鼠，SPRAGUE-DAWLEY；二膦酸 盐类；骨密度

【摘要】目的观察新型双膦酸盐B M210955(Ibandronate)防治卵巢切除大鼠骨量丢失的效果。方法取10～12月龄SD大鼠40只，分为4组，实验组大鼠作双侧卵巢切除3个月后， 再给予BM210955 0.5mg·kg^-1.d^-1，用药3个月。设骨质疏松动物模型(OP模 型)对照组，假手术对照组及OP模型+BM210955及尼尔雌醇组作比较。结果 骨干重、灰重和钙含量及股骨骨密度OP模型对照组低于假手术对照组 ，BM210955及尼尔雌醇两用药组高于OP模型对照组且均有显著性意义(P＜0.02或P＜0.001)；全身骨密度水平BM210 955及尼尔雌醇两用药组较OP模型对照组分别增加8.7%及0.9%；椎骨、胫骨骨小梁面积BM210 955及尼尔雌醇用药组均高于OP模型对照组且均有显著性意义(P＜0.01) ；尿钙与肌酐(Ca/Cr)比值BM210955及尼尔雌醇用药组低于OP模型对照组均有显著 性意义(P＜0.001)，尿羟脯氨酸与肌酐(HOP/Cr)比值及血 清碱性磷酸酶(ALP)的水平，BM210955及尼尔雌醇用药组较OP模型对照组均有下降趋势。结论SD大鼠卵巢切除3个月后出现明显的骨质疏松，BM210955对卵 巢切除骨质疏松动物模型大鼠骨量的丢失有显著治疗作用。

Study on the effect of bisphosphonate (BM210955) on bone loss in oophorectomized rats

YAO Jilong

(Institute of Senile Medicine,Shanghai Medical University,Shangh ai 200032)

WANG Hongfu

(Institute of Senile Medicine,Shanghai Medical University,Shangh ai 200032)

HUANG Minli,et al.

(Institute of Senile Medicine,Shanghai Medical University,Shangh ai 200032)

【Abstract】ObjectiveTo obse rvate the effect of a bisphosphonate BM210955 (Ibandronate) on prevention agains t bone loss of oophorectomized rats.Methods40 SD rats aged 10～12 months were divided into 4 groups. Bilateral oophorectomy w as performed in the experiment rats. Three months later, the rats were given BM210955 in dosage of 0.5mg·kg^-1.d^-1 by gavage for 3 months. The bisphosphonate-treated rats were compared with osteoporosis animal model (OP mo del) control group, fals e operation control group and OP model with nilestriol group.Re sultsDry bone weight, bone ash weight, bone calcium content an d femur bone mineral density in OP model control group were lower than those in false operation control group, BM210955-treated OP model group and nilestriol- treated OP model group (P＜0.02 or P＜0.001). The body bone mineral density was increased by 8.7% and 0.9% i n BM210955 and nilestriol administration groups respectively than that in OP mod el control. The bone trabecular areas of vertebra and tibia were significantly h igher in BM210955 or nilestriol group than that in OP model control groups (P＜0.001). The urinary calcium/creatinine ratio was signif icanly lower in BM210955 or nilestriol group than that in OP model control group (P＜0.001). The urinary hydroxyproline/creatinine rat io and serum alkaline phosphatase level showed a decreas ing tendency in BM210955 and nilestriol group as compared with OP model control group.ConclusionsThe oophorectomized SD rats showed clearly osteoporosis six months after operation. BM210955 has significant therapeutic effects on the osteoporosis of rats.

【Key words】Osteoporosis; Rats, Sprague-Dawley; Di phosphonates; Bone density

(Chin J Endocrinol Metab, 2000,16:208-211 )

双膦酸盐在临床绝经后妇女骨质疏松症防治中疗效显著^{〔1，2 〕}。随着骨质疏松症(OP)的发现日益增多，对 双膦酸盐类药物的研制受到关注。BM2109 55(Ibandronate)为目前国外正在研究开发的最具活力的新型双膦酸盐制剂。本研究应用国 内首次合成的BM210955进行动物实验，观察该药对卵巢切除后大鼠骨量丢失 的治疗作用。

材料和方法

一、动物

SD雌性大鼠40只，10～12个月龄，体重270～380 g，上海医科大学放射医学研究所实验动物 房提供。

二、药物

BM210955：江苏原子医学研究所国家重点实验室提供。尼尔雌醇：上海第十二制药厂生产。

三、实验分组

分为4组，每组大鼠10只，各组体重差别无显著性(P＞0.05)。

1.假手术组(A组)：仅切除卵巢周围小块脂肪组织，手术3个月后开始灌服生理盐水，1 ml· 只^-1.d^-1，共90天。

2.OP模型对照组(B组)：行双侧卵巢切除。3个月后开始灌服生理盐水，方法同上，共90天。

3.OP模型+BM210955用药组(C组)：行双侧卵巢切除，3个月后给BM210955 0.5 mg·kg^-1.d^-1，加生理盐水溶解灌服，方法同上，共90天。

4.OP模型+尼尔雌醇用药组(D组)：行双侧卵巢切除，3个月后给尼尔雌醇，每次1 mg/kg，加 生理盐水溶解灌服，第一周灌药二次，以后每周一次，共90天。

四、样本收集

1.尿标本：行卵巢切除前及实验结束后用代谢笼分别收取24小时尿液，-20℃冰箱保存待测 。

2.血标本：实验结束后，10%乌拉坦(1 ml/100 g体重)腹腔注射麻醉动物，颈动脉插管 取血，离心取血清，-20℃冰箱保存待测。

3.骨标本：动物取血后，先做全身骨密度测定，然后分离左、右侧股骨，腰椎椎体，左侧胫 骨进行相应的处理和测试。

五、观测指标和方法

1.骨干重、灰重和钙含量：取左侧股骨，置烘箱120℃烘1小时，万分之一电子天平按阿基米 德原理测量股骨体积(cm³)。随后以2份氯仿+1份甲醇混合液，脱脂72小时。置烘箱120℃ 烘6小时，冷却后称得干重(g)，再置800℃马福氏炉内灰化6小时，干燥冷却后称取灰重。骨 钙含量的测定采用PE-3110型原子吸收分光光度计，精确称量0.1 g灰化股骨，以4 mol/L盐 酸溶解，并以0.2%的硝酸镧溶液稀释1000倍后上机测定骨钙含量。骨干重 、灰重和钙含量均以g/cm³表示。

2.全身骨密度：采用DPX-L型骨密度仪(美国LUNAR公司生产)，进行测定，精度为1%，单位 为g/cm²。

3.股骨骨密度：采用中国测试技术研究院研制的SPA型单光子大鼠骨密度 仪，测右侧股骨全长1/2交界处的骨密度(g/cm²)，精度为2%。

4.抗弯力测定：采用AG-2020KNA型万能材料试验机(日本岛津生产)进行测定，置标本于跨 距为22 mm的支架上，以2 mm/min的速度作三点弯曲试验，记录股骨断裂载荷(牛顿N)。

5.血、尿骨代谢指标的测定：血E₂的测定采用放免法(药盒由北方生物技术研究所提供)， 血碱性磷酸酶(ALP)采用动力学法由ENCORⅡ型自动生化分析仪(美国贝克公司生产)测定，尿 钙(Ca)采用EDTA滴定法，尿肌酐(Cr)采用苦味酸法；尿羟脯氨酸(HOP)采用改良血尿羟脯氨 酸测定法。各项指标测定的批内CV均＜10%，批间CV均＜1 5%。

6.椎骨及胫骨切片显微形态计量：取腰椎中间松质骨及左胫骨上段1/3处，常规 制片，先测量固定视野的面积，后测量固定视野中骨髓腔面积的总和，两者相减即得骨小梁 面积，单位为μm²/视野。

六、统计学处理

各项观测数据以±s表示，均采用样本均数差别的t检验。

结果

一、骨干重、灰重和钙含量的改变

由表1结果可见骨干重、灰重和钙含量的水平B组明显低于A组，而C、D两组明显高于B组。说 明用BM210955或尼尔雌醇后均可显著阻止OP模型大鼠骨钙的丢失。

二、股骨骨密度、抗弯力和全身骨密度的改变

由表2可见B组股骨骨密度和全身骨密度的水平较A组显著降低；抗弯力 降低无统计学意义；C、D两组全身骨密度和股骨骨密度的水平均显著高于 B组，抗弯力各组间差异无显著性(P＞0.05)。

三、各组大鼠血ALP及尿HOP/Cr、Ca/Cr比值的改变

由表3可见血清ALP和尿HOP/Cr比值B组高于A组，C、D两组低于B组，但差异无显著性；尿Ca /Cr比值B组高于A组，但无统计学<