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【摘要】目的本文研究白介素-1(IL-1)、干扰素-α(IFN-α)和肿瘤坏死因子(TNF)对人正常甲状腺细胞环磷酸腺苷(cAMP)生成的影响。方法运用人甲状腺细胞原代培养技术和放免分析技术，检测不同种类细胞因子刺激甲状腺细胞引起的cAMP释放状况。结果(1)IL-1、IFN-α和TNF均可促进甲状腺细胞基础cAMP的释放。(2)IL-1在10-3～103U/ml的浓度范围内，可明显增强促甲状腺激素(TSH)对甲状腺细胞生成cAMP的刺激效应，其中以10-1U/ml的IL-1作用最强。(3)IFN-α对TSH刺激甲状腺细胞cAMP的生成具有双向调节作用，10-2～1U/ml可增加cAMP释放，而103U/ml时则抑制TSH的刺激效应。(4)10～104U/ml的TNF使TSH刺激甲状腺细胞生成cAMP的量显著减少。结论多种细胞因子参与甲状腺功能的调节，并可能与自身免疫性甲状腺疾病的发生发展过程有一定关联。
Cytokines modulate the secretion of cAMP by normal human thyroid cellsLiu Chao,Jiang Xuqin,Qin Youwen,et al.Department of Endocrinology,The First Affiliated Hospital,Nanjing Medical University,Nanjing,210029
【Abstract】ObjectiveThe effects of recombinant interleukin-1(IL-1), interferon-α(IFN-α) and tumor necrosis factor (TNF) on the release of cAMP from cultured human thyroid cells were studied.MethodsThyrocytes cultures and radioimmunoassay are used to detect the different cAMP productions of thyrocytes affected by different kinds of cytokines.ResultsIt was found that: (1)All the three cytokines significantly increased basal cAMP generation at the dose of 10-3-103U/ml for IL-1, 10-2-102U/ml for IFN-α and 10 or 103U/ml for TNF. (2)In the same range of concentration, IL-1 also stimulated the TSH-induced cAMP secretion. The action was most potent with 10-1 U/ml concentration. (3)IFN-α had a biphasic effect on cAMP release. At a lower dose(10-2-1U/ml) IFN-α increased the TSH-stimulated generation, while a 103U/ml concentration had an inhibitory effect. (4)At the dose of 10-104U/ml TNF statistically inhibited TSH-induced cAMP release.Conclusion The results suggest that cytokines possess hormonal actions on cAMP secretion by thyroid cells, and they may be related to autoimmune thyroid diseases.
【Key words】CytokineThyroidcAMP
(Chin J Endocrinol Metab 1998,14:126-129)
细胞因子主要包括白介素(IL)、干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子(TNF)、集落刺激因子和转化生长因子等。它通过内分泌、自分泌、旁分泌或胞内分泌等形式，广泛而精细地调节内分泌腺体的功能，并参与自身免疫性内分泌疾病的发生发展过程〔1～3〕。但是，对于细胞因子与甲状腺和自身免疫性甲状腺疾病(AITD)关系的研究尚处在初级阶段，结论仍有分歧〔2～7〕。本文在研究IL-1、IFN-α和TNF对体外培养的人正常甲状腺细胞环磷酸腺苷(cAMP)生成影响的基础上，探讨细胞因子与甲状腺功能的内在联系，及其在AITD发病中的作用和意义。
材料和方法
一、甲状腺细胞培养
采用刘氏等介绍的培养方法〔8〕。细胞浓度为1×105/孔。
二、细胞因子试验
甲状腺细胞培养24小时后，换以Eagle培养液(对照)或含不同浓度的IL-1、TNF(军事医学科学院基础所产品)或IFN-α(Schering产品)的试验液，继续培养48小时。吸弃上清液，分别加入改良Hanks液或含103mU/L牛促甲状腺激素(TSH，Sigma公司产品)的改良Hanks液〔8〕，刺激6小时。收集每孔上清液200μl，于-20℃保存，待测cAMP。后者采用竞争性蛋白结合法测定。
三、统计学处理
本研究的批内和批间变异系数分别为3.2%～8.6%和5.9%～17.7%。差异的显著性采用F检验和Q检验。
结果
一、IL-1、IFN-α和TNF对甲状腺细胞基础cAMP分泌的影响
三种细胞因子均可刺激基础状态下甲状腺细胞
图1IL-1对甲状腺细胞基础cAMP生成的影响
Fig1Effects of IL-1 on the basal cAMP production of thyrocytes
与对照比较*P＜0.01;与10-2比较△P＜0.05
vs control group * P＜0.01
vs 10-2 group △ P＜0.05
图2IFN-α对甲状腺细胞基础cAMP生成的影响
Fig 2Effects of IFN-α on the basal cAMP production of thyrocytes
与对照比较*P＜0.01;**P＜0.01
vs control group * P＜0.01;**P＜0.01
cAMP的生成，10-2U/ml、10U/ml和102U/ml的IL-1分别使cAMP产值增加5.49、7.20和7.99倍(图1)；相同浓度的IFN-α使cAMP增加10.48、4.43和2.29倍(图2)；10U/ml和103U/ml的TNF使cAMP释放量增加4.69和5.22倍(图3)。
二、IL-1对TSH刺激甲状腺细胞生成cAMP的影响
103mU/L的TSH可明显地增加甲状腺细胞生成cAMP的量(图4～6)。IL-1在10-3～10-1U/ml的浓度范围内，TSH刺激甲状腺细胞生成cAMP的量随IL-1剂量的增加而增大；在10-1～103U/ml的
图3TNF对甲状腺细胞基础cAMP生成的影响
Fig 3Effects of TNF on the basal cAMP production of thyrocytes
与对照比较**P＜0.001
vs control group **P＜0.001
图4IL-1对TSH刺激甲状腺细胞生成cAMP的影响
Fig 4 Effects of IL-1 on the cAMP production of TSH-stimulated thyrocytes
与对照比较△P＜0.01;与无IL-1比较*P＜0.05,**P＜0.01
vscontrolgroup△ P＜0.01;vs0group * P＜0.05，**P＜0.01
图5α-IFN对TSH刺激甲状腺细胞生成cAMP的影响
Fig 5Effects of IFN-α on the cAMP production of TSH-stimulated thyrocytes
与对照比较△P＜0.001;与“0”比较*P＜0.05,**P＜0.01
vscontrolgroup △ P＜0.001;vs0group * P＜0.05,**P＜0.01
图6TNF对TSH刺激甲状腺细胞生成cAMP的影响
Fig 6Effect of TNF on the cAMP production of TSH-stimulated thyrocytes
与对照比较△P＜0.001;与“0”比较*P＜0.01
vscontrolgroup △P＜0.001;vs0group *P＜0.01
剂量区间，IL-1浓度越高，cAMP释放量越小，但仍高于TSH单独刺激cAMP的产值(图4)。
三、IFN-α对TSH刺激甲状腺细胞生成cAMP的影响
IFN-α在10-2～1U/ml的浓度范围内，可明显增强TSH对甲状腺细胞生成cAMP的刺激效应，103U/ml的IFN-α显著抑制TSH刺激甲状腺细胞生成cAMP的作用(图5)。
四、TNF对TSH刺激甲状腺细胞生成cAMP的影响
