关键词： 地诺前列酮；胎盘；钙；血液速度

【摘要】目的探讨前列腺素E₂(PGE₂ )对正常妊娠及妊高征孕妇胎儿胎盘循环的调节作用。方法在50例足月正常孕妇(对照组)及37例妊高征合并IUGR孕妇(妊高征组)中，利用共焦点激光扫描显微镜测定了PGE₂ 对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内游离钙离子(Ca²⁺)i动态变化的影响，同时用放免法测定了其脐静脉血中PGE₂ 浓度。结果PGE₂使两组HUVEC中(Ca²⁺)i上升, 脐血中PGE₂ 值在妊高征组为5.4±0.6pg/ml与对照组的15.3±1.2 pg/ml相比，显示有意义的低值(P＜0.05)。结论PGE₂可能为胎儿胎盘循环的血管扩张因子；妊高征组脐血中PGE₂ 浓度降低使胎儿胎盘血流阻力增加可能影响胎儿生长发育。

PGE₂ and feto-Placental Circulation

ZOU Li, XU Keshu, YI Qing, et al.

Department of Obstetrics and Gynecology, Xiehe Hospital of Tongji Medical University, Wuhan 430022

【Abstract】ObjectiveTo clarify whether prostaglandin E₂ (PGE₂) acts as a criculating regulator of feto-placental unit in cases of normal pregnancy and preeclampsia with IUGR.MethodThe study population consisted of 50 normal pregnant women (control group) and 37 pregnant women with preeclampsia andIUGR (study group). We have examined the effect of PGE₂ on Human umblical venous endothelial cells( HUVECs) cytosolic Ca［(Ca²⁺)i］ by confocal laser scanning microscopy. We also measured the level of PGE₂ in cord blood using PGE₂ RIA kit.ResultsPGE₂caused a sustained (Ca²⁺)i increase in subjects with preeclampsia group and control group. PGE₂of blood group was 5.4±0.6 pg/ml and 15.3±1.2 pg/ml in study group and control group (P＜0.05).ConclusionPGE₂ may serve as a vasodilator of the fetoplacental circulation. Fetal growth may be affected by lower PGE₂ level in cord blood of patients with preeclam psla.

【Key Words】DinoprostonePlacentaCalciumBlood flow velocity

血管扩张性前列腺素之一的PGE₂在妊娠中不仅调节母体血压，而且也调节子宫胎盘循环，但是在对胎儿胎盘循环方面PGE₂ 的作用还有待深入研究。有学者报道向胎儿侧投予PGE₂ 诱发母体血管扩张^［1］，亦有学者报告PGE₂ 可能通过收缩胎儿胎盘血管，扩张子宫管发挥不同的调节机能作用^［2］。那么PGE₂ 是胎儿胎盘循环的扩张因子还是收缩因子?为了探讨PGE₂ 在胎儿胎盘循环中的调节作用，我们从PGE₂ 对HUVEC内离子钙动态的影响及脐血中PGE₂ 浓度两方面进行了研究。

资料和方法

一、研究对象

选取1995年1月至1998年5月收治妊娠35～40周，无内科合并症的孕妇50例(对照组)和妊高征合并胎儿宫内生长迟缓（IUGR）孕妇37例(妊高征组)，妊高征诊断标准见参考文献［3］。

二、方法

1．HUVEC内(Ca^2＋ )i的测定

HUVEC的分离：经阴道分娩及剖宫产时，无菌采取中段脐带约20 cm，灭菌PBS灌洗净脐静脉后，用Jaffe^［4］方法分离脐静脉血管内皮细胞，含0.1％胶原酶的PBS液将脐静脉充满，37℃水浴10分钟,将所得的细胞浮游液以3000 rpm离心10分钟，获得内皮细胞。经台盼蓝确认生存细胞在90％以上。将分离后的细胞放入培养皿，加入MEM培养液+10%FBS(fetal bovine serum)5%CO₂ ,37℃培养2小时，使之稳定后用于测定。此外，通过SAB-PO试剂盒确认内皮细胞内Ⅷ因子关连抗原及CD31糖蛋白的局部所在判定了HUVEC。

Flou-3AM负荷：Fluo-3为一种励起波长488～500 nm的钙感受性荧光色素，在荧光波长530 nm的可视部领域内使用可能的一波长励起一波长荧光型的钙荧光指示药。以最后浓度为5μM的Fluo-3AM加入培养后的内皮细胞中37℃ 45分钟孵化使Flou-3进入细胞内，此后用PBS溶液3次洗净，在新的MEM培养液中安定15分钟后放于倒置显微镜的测量台上，在室温下进行试验。以Fluo-3荧光强度的上升表示细胞内Ca^2＋浓度的上升通过激光显微镜的处理系统进行测定。

PGE₂ 的刺激：调整HUVEC的细胞密度使每一视野的细胞数为5～10个，PGE₂ 投予前记录静止状态下HUVEC的荧光画像，此后向HUVEC直接添加PGE₂ 再连续记录荧光画像，同时还在细胞外液含有Ca^2＋ 2 mM及无钙的状态下分别进行测定。

(Ca^2＋)i的测定：以共焦点激光显微镜(ACAS570)进行测定。本研究重点测定相对(Ca^2＋ )i浓度的变化，即PGE₂ 添加时呈现最大反应的画面与添加前的画面比较，以(Ca^2＋)i上升变化的百分率进行了计算。

2．脐静脉血中PGE₂ 值的测定

分娩时用含EDTA的试管采脐静脉血7 ml经4℃,3 000 rpm离心10分钟后取血清用于测定。先用Amprep minicolumn抽出标本，然后用Amersham公司提供的PGE₂ 放免试剂盒进行测定。

3．统计学方法

采用t检验。

结果

静止时HUVEC内(Ca^2＋ )i浓度在对照组为4.35±0.09 nM，妊高征组为5.86±0.11 nM，妊高征组显示有意义的高值(P＜0.05)，在分布上无显著差异。PGE₂ 在细胞外液无Ca^2＋条件下，对两组均未惹起有意义的变化，但当外液被换上有2 mM Ca^2＋的溶液后，所有的细胞均受PGE₂ 的作用，使细胞内(Ca ^2＋)i上升70%，峰值在刺激后约1分钟，持续时间为10分钟左右，两组无明显差异。此外，脐血中PGE₂ 值在妊高征组为5.4±0.6 pg/ml与对照组的15.3±1.2 pg/ml相比，显示有意义的低值(P＜0.05)。

讨论

在胎儿循环中，胎盘及胎儿的脑干均能合成PGE₂ ，但主要来源于胎盘。Thorburn^［5］报道胎盘通过分泌PGE₂ 调节胎儿主要器官的功能，使各器官成熟及代谢通路建立，但抑制其功能；分娩时，断脐和胎盘娩出后新的生命有完全的功能和成熟的器官适应新环境。在对胎儿血管作用方面，Clyman等^［6］证明PGE₂是胎羊动脉导管的强力扩张剂。由于妊娠时胎儿通过胎盘从母体获得营养，所以胎盘循环缺血状态易发生IUGR。

另外，血管内皮细胞可产生分泌血管扩张或收缩物质与血管张力的调节密切相关^［7］。Fox等^［8］报道人脐血管不受任何神经支配。因此，胎儿胎盘血流量的调节可能由循环血中特殊的或血管内皮细胞分泌的血管活性物质调节。Cai等^［9］报道脐血管内皮细胞内有多种血管活性物质存在。近年来认为细胞内Ca 是多种类型细胞受外来刺激后向细胞内传达信息的第二信使,其浓度变化与应答细胞机能变化相适应^［10,11］。内皮细胞不存在Ca^2＋通道，仅显示非选择性阳离子通道是Ca^2＋的流入通道，故认为PGE₂ 所引起的细胞内Ca^2＋的上升是通过胞膜受体或非选择性阳离子通路进行的。细胞内Ca^2＋通过除极化使Ca^2＋内流从而使内皮细胞依赖性弛缓因子(EDRF)释放。本研究中PGE₂使两组HUVEC内(Ca^2＋ )i上升，提示PGE₂ 可能是胎儿胎盘系的血管扩张因子，同时脐静脉血中PGE₂ 浓度在妊高征合并IUGR组显示有意义的低值，进一步证明了脐血中PGE₂ 浓度的降低使胎儿胎盘血流阻力增加,可能影响胎儿的生长发育，有临床指导意义。

参考文献

1Rankin JHG, Phernetton TM. Effect of prostaglandin E₂ on ovine maternal placental blood flow. Am J Physiol, 1976, 231: 754-759.

2Glance DG, Elder MG, Myatt L. Prostaglandin production and stimulation by angiotensin II in the isolated perfused human placental cotyledon. Am J Obstet Gynecol, 1985, 151: 387-391.

3郑怀美主编. 妇产科学. 第3版. 北京:人民卫生出版社, 1994. 113-114.

4Jaffe EA, Nachman RL, Becker CG, et al. Culture of human endothelial cells derived from umbilical veins. Identification by morphologic and immunologic criteria. J Clin Ivest, 1973, 52: 2745-2756.

5Thorbum GD. The placenta, PGE₂ and part