摘要：目的探讨子宫平滑肌和胎膜组织表皮生长因子受体(EGFR)mRNA表达水平与分娩发动的关系。方法用半定量逆转录聚合酶链反应检测分娩发动前、后各10例产妇子宫平滑肌和胎膜组织的EGFR mRNA表达水平。结果子宫平滑肌EGFR mRNA表达水平由分娩发动前的0.91±0.32增高至分娩发动后的1.33±0.23，两者比较，差异有显著性(P＜0.05)；胎膜组织EGFR mRNA表达水平由分娩发动前的1.05±0.30增高至分娩发动后的1.65±0.71，两者比较，差异有显著性(P＜0.05)。结论分娩发动前、后子宫平滑肌及胎膜组织中EGFR mRNA表达水平升高；并与分娩发动有密切关系，是诱发子宫平滑肌收缩的重要因素。

Correlation between Epidermal Growth Factor Receptor Messenger RNA Expression and the Onset of Labor

CHEN Jianmei

(Departrnent of Obstetrics and Gynecology, The Second Affiliated Hospital, Hunan Medical University, Changsha 410008, China)

ZENG Wenjie

(Departrnent of Obstetrics and Gynecology, The Second Affiliated Hospital, Hunan Medical University, Changsha 410008, China)

WU Jiajie

(Departrnent of Obstetrics and Gynecology, The Second Affiliated Hospital, Hunan Medical University, Changsha 410008, China)

Abstract：ObjectiveTo study the correlation between epidermal growth factor receptor messenger RNA expression and the onset of labor.MethodSemiquantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction,using GAPDH as internal standard,was applied to determine the levels of epidermal growth factor receptor messenger RNA in human myometrium (n=20) and fetal membranes (n=20) before and during labor.ResultsIn myometrium,epidermal growth factor receptor messenger RNA increased from 0.91±0.32 before labor to 1.33±0.23 after the onset of labor (P＜0.05).In fetal membranes, epidermal growth factor receptor messenger RNA increased from 1.05±0.30 before labor to 1.65±0.71 after the onset of labor (P＜0.05).ConclusionThe study indicates it is Up-regulation of epidermal growth factor receptors messenger RNA expression in myometrium and fetal membrane before and after the onset of labor.

Key words：Receptos, epidermal growth factor-urogastrong；Uterus; Placenta; Labor onset▲

现代分娩学提出的分娩发动的几种理论^［1］，如子宫下段成熟理论、内分泌控制理论、机械性理论等，都认为各种分娩动因最终将引起前列腺素释放，诱导产生强有力的宫缩。近年来，有许多研究表明，表皮生长因子(EGF)可通过调节前列腺素类物质的产生而引起分娩发动。EGF是一种自分泌或旁分泌的、并对多种细胞生长、分化以及功能起调节作用的因子^［2］，它必须与靶细胞表面的表皮生长因子受体（EGFR）结合才能发挥作用。本研究应用半定量逆转录聚合酶链反应技术（RT-PCR），检测正常足月妊娠妇女的子宫平滑肌标本和胎膜标本中EGFR mRNA表达水平，以探讨EGFR基因表达与分娩发动的关系。

资料与方法

一、研究对象

收集1998年9月～12月期间，在我院妇产科及湖南省妇幼保健院行剖宫产手术分娩的产妇20例，根据临产状态分为未临产组和已临产组，每组10例。其分组标准如下：（1）未临产组：胎儿监护仪显示无宫缩，肛查宫口未开。（2）临产组：自然临产，胎儿监护仪显示有规律宫缩，肛查或阴道检查宫口扩张≥4 cm。两组产妇均无妊娠高血压综合征(妊高征)、多胎妊娠以及内外科合并症。术前肝、肾功能检查正常。两组产妇手术均采用连续硬膜外麻醉，术前均未使用平滑肌松弛素或前列腺素类衍生物。两组产妇年龄、产次、孕龄及新生儿出生体重比较，差异均无显著性(P＞0.05)。

二、方法

（一）组织取材

每例产妇取新鲜的子宫平滑肌和胎膜两份标本。即在剖宫产时，胎盘娩出前，宫体及全身未用宫缩剂时，无菌切取子宫下段，横切口上缘中段一小条平滑肌组织约0.5～1．0 g。胎盘娩出时，在未用宫缩剂的情况下，无菌剪取约2 cm×2 cm×3 cm的胎膜组织。两份标本分别立即放入液氮内速冻，待转移至实验室后，贮存在-70℃超低温冰箱待测。

（二）半定量RT-PCR检测子宫平滑肌和胎膜组织中EGFR mRNA水平

1．引物：EGFR引物^［3］为P₁ 5′-AGC TCA CGC AGT TGG GCA CT-3′， P₂ 5′-TCT CAT GGG CAG CTC CTT CA-3′，该对引物扩增片段长度为305bp。三磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）作为内参照，引物参考GAPDH基因完整序列设计^［4］，其引物P₁′ 5′-GCT GGC GCT GAG TAC GTC GT-3′，P2′ 5′-TGG GTG TCG CTG TTG AAG TC-3′。该对引物扩增片段长度为605bp。

2．RT-PCR操作步骤：（1）采用Trizol试剂提取标本组织中总RNA。（2）用核酸蛋白检测仪（Beck- man）检测总RNA水平。（3）检测RNA完整性。（4）采用二步法RT-PCR^［3］。经过充分预实验，以确定模板量和反应周期，保证聚合酶链反应（PCR）产物定量分析是在指数增长期。①逆转录以RNA为模板，反转录合成cDNA。②PCR以cDNA为模板行体外扩增。（5）RT-PCR扩增产物以1.5%琼脂糖凝胶、100V电压电泳，40～60 min在紫外线透射仪上观察，并与PCR标准相对分子质量比较，305 bp为EGFR扩增片段，605 bp为内参照GAPDH扩增片段。（6）凝胶摄相后用图像处理系统计算其吸光度（A）×面积值，与内参照相比较计算其比值。

3.组织总RNA行PCR检测：组织总RNA不经逆转录直接行PCR检测，EGFR或GAPDH均无扩增产物出现。

三、统计学方法

采用t检验、t′检验。

结果

一、EGFR mRNA在两种组织中的表达

两组子宫平滑肌标本及胎膜组织标本中均有EGFR mRNA表达（图1）。

1：相对标准分子质量2.临产组子宫平滑肌

3：临产组胎膜组织4：未临产组子宫平滑肌 5：未临产组胎膜组织

1两组子宫平滑肌、胎膜组织RT-PCR 产物电泳分析

二、两组产妇子宫平滑肌组织中EGFR mRNA表达水平比较

在子宫平滑肌组织中，未临产组EGFR mRNA表达水平为0.91±0.32,临产组EGFR mRNA表达水平为1.33±0.23,临产组明显高于未临产组,差异有显著性(P＜0.05)。

三、两组产妇胎膜组织中EGFR mRNA表达水平比较

胎膜组织中，未临产组EGFR mRNA表达水平为1.05±0.30，临产组EGFR mRNA表达水平为1.65±0.71，临产组明显高于未临产组，两组比较，差异有显著性组(P＜0.05)。

讨论

一、EGFR的生物学特性

EGFR是相对分子质量为170000的多肽，它包含2个主要区域，即配体结合区位于细胞外部分；酪氨酸激酶区位于胞浆部分，两者由跨膜区连接。酪氨酸激酶区具有蛋白激酶活性^［2］。EGF与EGFR结合时，蛋白激酶活性迅速增加，并使细胞蛋白酪氨酸磷酸化，从而引起细胞内其他酶通道激活，引起一系列细胞内反应，表现为细胞内钙含量增加，发生细胞分裂等，产生不同的生理效应^［5］。

二、EGFR mRNA在子宫平滑肌和胎膜组织的表达

本研究结果表明,在人足月妊娠的子宫平滑肌和胎膜组织中均有EGFR基因表达,并且不论是子宫平滑肌或是胎膜组织，分娩发动后较分娩发动前EGFR mRNA表达水平均显著升高。国外报道，晚期妊娠子宫平滑肌和胎膜上有EGFR蛋白存在^［6］，分娩发动前后EGFR蛋白水平在子宫平滑肌和胎膜上是升调节的^［7］。但他们分析的方法是结合测定法和免疫组化法。而本研究从EGFR基因表达水平，证实了在子宫平滑肌细胞和胎膜细胞上可能局部产生EGF受体。

在妊娠末期，人羊水中EGF水平处于高值^［8］，这为在分娩过程中EGFR基因表达增高的子宫平滑肌和胎膜组织提供了足够的多肽。在子宫平滑肌组织，分娩发动过程中，EGFR mRNA表达的这种升调节，能增加子宫平滑肌对EGF的敏感性，由于EGFR具有蛋白激酶活性，使EGF可能在分娩发动过程中活化和维持子宫平滑肌收缩。在啮齿类动物的体外实验中，EGF已经显示刺激子宫收缩的作用，包括快速发动节律收缩和增加基础张力^［9］。由于前列腺素(PG)在分娩发动中的作用是肯定的^［1］