【摘要】目的探讨p53蛋白表达对子宫内膜样腺癌血管生长的影响，及肿瘤血管生长与临床病理的关系。方法采用免疫组织化学链菌素亲生物蛋白-过氧化物酶连接法（免疫组化SP法），分别检测85例子宫内膜样腺癌组织中血管增生及p53蛋白表达情况。结果(1）子宫内膜样腺癌中p53蛋白表达总的阳性率为50.6%，其中晚期为69.2%，高于早期的42.4%（P＜0.05）。（2）肿瘤内微血管密度（IMD）值与病理分期、病理分级和肌层浸润深度等因素有关，其中晚期和早期的IMD值分别为8.31±4.78和13.27±6.14 （P＜0.01）；G₁、G₂和G₃的IMD值分别为8.95±5.15、9.28±4.87和14.73±7.66（P＜0.01）；无肌层浸润、浅肌层浸润和深肌层浸润的IMD值分别为8.45±5.53、8.95±4.99和11.96±6.39 (P＜0.05)。（3）IMD值与 p53蛋白表达程度有关，其中阴性、弱阳性和强阳性的IMD值分别为5.52±2.11、11.75±4.18和16.00±4.63（P＜0.01）。结论子宫内膜样腺癌血管增生可能受p53蛋白表达的调控，p53蛋白表达可促进肿瘤血管的增生。肿瘤血管增生与临床病理有密切关系，有可能成为预测子宫内膜样腺癌预后的指标。

The Relationship between Angiogenesis and

p53 Overexpression in Endometrioid Adenocarcinoma

YAO Yuan, PENG Zhilan, YIN Rutie,et al.

The Second Hospital, West China University of Medical Sciences, Chengdu 610041

【Abstract】ObjectiveTo determine the relationship between angiogenesis and p53 overexpression and explore the relationship between angiogenesis and clinicopathologic features in endometrioid adenocarcinoma. MethodsAngiogenesis was evaluated by intratumoral microvessel density (IMD). Eighty-five endometrioid adenocarcinomas′ IMD were identified by immunohistochemical staining of endothelial cells for factor VIII-related antigen, and the expression of p53 protein was stained with the same method by it′s monoclone antibody. Results(1) The positive rate of p53 expression in endometrioid adenocarcinoma was 50.6%. The positive rate in stage III～IV (69.2%) was higher than that in stage I～II(42.4%) (P＜0.05). (2) IMD was higher in stage III～IV (13.27±6.14) than that in stage I～II (8.31±4.78) (P＜0.01). IMD in G₁, G₂ and G₃ was 8.95±5.51, 9.28±4.87 and 14.73±7.66, respectively (P＜0.05). In groups of non-myoinvasion, ＜1/2 myoinvasion and ≥1/2 myoinvasion, IMD was 8.45±5.53, 8.95±4.99 and 11.96±6.39, respectively (P＜0.05). (3) In negative, weakly positive and strong positive groups of p53 overexpression, IMD was 5.52±2.11, 11.75±4.18 and 16.00±4.63, respectively (P＜0.01). ConclusionsAngiogenesis tightly correlated with clinicopathologic factors, such as stage, grade and myoinvasion, is promoted by p53 overexpression in endometrioid adenocarcinoma. It can be concluded that angiogenesis may act as a predictor of prognosis of endometrioid adenocarcinoma.

【Key words】Blood vesselsEndometrial neoplasmsAdenocarcinomaProtein p53

血管作为血液灌注的管道，在实体肿瘤的生长及转移中起着极其重要的作用。近年来，肿瘤生长依赖于血管增生的观点已为多数学者接受，而肿瘤血管的增生受到了多种因素的调控。许多研究显示，p53蛋白可以降调节抑制血管增生的凝血酶反应素-1（TSP-1）和升调节促进血管增生的血管内皮生长因子（VEGF），因而成为调控肿瘤血管生长的重要因素。本研究对子宫内膜样腺癌中肿瘤血管增生与p53蛋白表达的关系，以及肿瘤内血管增生程度与肿瘤临床病理特点之间的关系进行了探讨。现报道如下。

资料与方法

一、研究对象

选自1990年至1995年间于华西医科大学附属第二医院手术治疗的子宫内膜样腺癌患者共85例。患者平均年龄55.1岁（33～75岁）。绝经前22例，绝经后63例。按1988年FIGO标准确定病理分期及病理分级，其中I期56例、II期3例（I、II期为早期，病变局限于子宫）、III期25例、IV期1例（III、 IV期为晚期，病变超出子宫范围）；G₁ 42例、G₂ 32例、G₃ 11例；肌层浸润程度为无肌层浸润15例、浅肌层浸润（浸润深度＜1/2）43例、深肌层浸润（浸润深度≥1/2）27例。所有病例均不合并其他严重内科疾病，术前均未接受化学治疗（化疗）、放射治疗（放疗）或免疫治疗。

二、方法

1.主要试剂：第一抗体（一抗）为兔抗人VIII因子相关抗原的多克隆抗体IgG（美国ZYMED公司产品）和鼠抗人p53蛋白的单克隆抗体IgG2α（美国Santa Cruz公司产品）；第二抗体（二抗）为生物素标记的羊抗鼠及兔的通用型抗体IgG（美国ZYMED公司产品）；链菌素亲生物蛋白-过氧化物酶（SP）及3，3′-二氨基联苯胺均为美国ZYMED公司产品。

2.标本制备：标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，制成4 μm厚切片。

3.方法：采用免疫组织化学SP连接法（免疫组化SP法）。具体步骤：(1)二甲苯脱蜡及梯度乙醇洗涤3次；(2)1%过氧化氢-甲醇溶液浸泡30分钟；(3)在0.01 mol/L柠檬酸（pH为6.0）缓冲液中，用700 W微波炉中档处理15分钟；(4)25%小牛血清，37℃培育30分钟；(5)滴加一抗（1∶100），37℃培育45分钟；(6)滴加二抗（1∶100），37℃培育15分钟；(7)滴加SP（1∶100），37℃培育15分钟；(8)滴加3，3′-二氨基联苯胺稀释液（1∶20），约5分钟，显微镜下控制显色；(9)干燥后复染、脱水、干燥、封片。以上除第4步外，每一步间均用磷酸缓冲液（PBS液）振荡浸洗3次，每次5分钟。以PBS液置换一抗染色作为空白对照。已知阳性切片作为阳性对照。实验中每批切片分别作1张空白对照和1张阳性对照切片。

4.肿瘤内微血管增生程度的评价：以肿瘤内微血管密度（IMD）作为评价指标，以抗VIII因子相关抗原的多克隆抗体IgG，对组织的内皮细胞进行染色，染色呈棕黄色为阳性，在100倍视野下选定肿瘤组织内血管密度最高的3个点，在200倍下计数每个视野的血管条数，以均值作为该病例的IMD值^［1］。

5.p53蛋白表达水平的测定：以抗人p53蛋白的单克隆抗体IgG2α，测定肿瘤组织内p53蛋白表达，细胞核染色呈棕黄色为阳性，选取代表该切片平均水平的区域，在200倍视野下计数100个细胞。判断标准：无阳性着色为阴性，着色细胞数＜50%为弱阳性，着色细胞数≥50%为强阳性^［2］。

在实验操作及计数IMD值和p53蛋白表达水平的过程中，均采用盲法。

三、统计学分析

应用SPSS-PC 4.0统计学软件包对结果进行统计学分析。

结果

一、p53蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达

85例子宫内膜样腺癌患者标本中，43例p53蛋白表达阳性，其中强阳性23例，弱阳性20例，总的阳性率为50.6%。早期与晚期的阳性率分别为42.4%（25/59）和69.2%（18/26），两者比较，差异有显著性（P＜0.05）。

二、IMD与临床病理

1.IMD与病理分期：59例早期病例的IMD值为8.31±4.78，26例晚期病例的IMD值为13.27±6.14，两者比较，差异有极显著性（P＜0.01）。

2.IMD与病理分级：G₁（42例）、G₂（32例）和G₃（11例）的IMD值分别为8.95±5.15、9.28±4.87和14.73±7.66，G₁、G₂分别与G₃比较，差异均有显著性（P＜0.05）。

3．IMD与肌层浸润：无肌层浸润（15例）、浅肌层浸润（43例）和深肌层浸润（27例）的IMD值分别为8.45±5.53、8.95±4.99和11.96±6.39，深肌层浸润分别与无肌层浸润、浅肌层浸润比较，差异均有显著性（P＜0.05）。

三、IMD与p53蛋白表达

p53蛋白表达阴性（42例）、弱阳性（20例）、强阳性（23例）的IMD值分别为5.52±2.11、11.75±4.18、16.00±4.63，两两比较，差异均有显著性（P＜0.05）。

讨论

一、子宫内膜样腺癌血管增生与临床病理的关系

近年来，对于肿瘤内血管增生与影响临床预后的因素，如病理分期、病理分级及肌层浸润深度等关系的研究结果不一致，绝大多数研究者认为，肿瘤血管增生与临床病理有密切关系，并且是独立的影响预后的因素。

（一）IMD与病理分期的关系

对于IMD与肿瘤病理分期及预后的关系，目前有争议，多数研究结果显示，肿瘤内血管增生与肿瘤病理分期有密切的关系。Hollingsworth等^［3］研究了43例晚期（III～IV期）卵巢癌病例，发现IV期血管密度高于III期，且血管密度越高，预后越差。经Cox比例风险模型分析，肿瘤病理分期是最好的预测预后<