【摘要】目的探讨整合素β₃和细胞内粘附分子（ICAM）与子宫内膜异位症的关系。方法收集子宫内膜异位症患者的子宫内膜（15例）、异位病灶组织（15例）及非子宫内膜异位症患者（30例，对照组）的子宫内膜，分3批对这些组织进行整合素β₃和ICAM的蛋白免疫印记法测定，并用VDS扫描对实验结果进行半定量。每批结果均用方差分析和t检验进行统计处理。结果3批结果趋势相同，子宫内膜异位症患者子宫内膜的整合素β₃和ICAM蛋白表达量均明显低于对照组同期子宫内膜的表达量。而异位病灶组织整合素β₃的表达较对照组明显降低，ICAM表达却明显高于对照组。结论子宫内膜异位症患者从子宫内膜到异位病灶，整合素β₃和ICAM均有明显的变化，这可能与子宫内膜异位症发生、发展和不孕有关。

Expression of Integrin β₃ and Intracellular Adhesion Molecule in Endometrium and Endometriotic Tissue

WU Junping^*, ZHANG Junhui^*, LIU Yinkun, et al.

^* Obstetrics and Gynecology Hospital of Shanghai Medical University, Shanghai 200011

【Abstract】ObjectiveTo study the relationship between integrin β₃ ,intracellular adhesion molecule(ICAM) and endometriosis.MethodsThe expression of integrin β₃ and ICAM protein were determined in 3 batches by immunoblotting method in 15 endometrium and 15 endometriotic tissues of patients with endometriosis and 30 endometrium from non-endometriosis subjects during the same menstrual phase. The results were scanned and semi-quantified, and then analysed by F test and t test.ResultsThe results from 3 measurements showed the same trend .Endometrium from patients with endometriosis expressed significantly fewer integrin β₃ and ICAM protein than those without endometriosis. On the other hand , the expression of integrin β₃ in endometriotic tissue was significantly lower while the ICAM expression was significantly higher than those in controls.ConclusionsIn patients with endometriosis, integrin β₃ and ICAM expression changed significantly from eutopic to ectopic endometrium which may be related to the development of endometriosis and infertility.

【Key words】EndometriosisCell adhesion moleculesAntigens, CDPlatelet membance glycoproteins

子宫内膜异位症（内异症）虽是良性疾病，但其广泛种植、易复发的特性与恶性肿瘤十分相似。整合素β₃和细胞内粘附分子(ICAM)与恶性肿瘤关系密切，在肿瘤转移、种植等行为上有一定作用。本研究测定整合素β₃和ICAM在子宫内膜与异位组织中的表达，探讨这些粘附分子与内异症的关系。

资料与方法

一、资料来源

1．研究组：1997年6月至12月就诊于上海医科大学妇产科医院，因内异症行全子宫切除或(和)卵巢子宫内膜异位囊肿切除或(和)异位病灶切除术的患者25例，年龄25～45岁，无其他内、外科疾病。子宫切除后立即刮取子宫内膜，标本置-20℃保存，子宫内膜组织标本15份，异位病灶(病理检查证实)组织标本15份。

2．对照组：30例，为上海医科大学妇产科医院1997年6月至12月的门诊或住院患者，年龄25～45岁，无其他内、外科疾病，其中10例为因月经失调行诊断性刮宫术，20例为子宫肌瘤行全子宫切除术，术后即取子宫内膜，置-20℃保存，病理检查显示增生期、分泌期内膜各为15份。

二、方法

1．标本处理：取组织约0.1～0.3 g剪碎，加入RIPA裂解液（0.5%去氧胆酸钠,0.1％ SDS，1% NP-40，1/1 000苯甲基磺酰氟）500 μl，振摇后冰浴30分钟。然后4℃、5 000 r/min离心15分钟，弃沉淀物。上清液中含有待测可溶性整合素β₃和ICAM，-20℃保存待测。

2．蛋白定量：取上清液20 μl用蒸馏水稀释至1 ml，用美国Pharmacia公司出品的UV3000分光光度仪测量260 nm和280 nm处的吸光度，得出蛋白浓度，再换算成原液中的浓度。

3．免疫印迹法：将PVDF膜放入甲醇中浸泡3分钟，蒸馏水漂洗，放入点杂交仪中，装好负压水泵，负压形成后用0.02 mol磷酸缓冲液（PBS）10 μl点膜，然后用标本原液5 μl点膜（3份），点样完毕后，将膜浸入封闭液（15 mmol Tris-HCl、pH7.4, 0.15 mol NaCl,0.25%明胶，3％ BSA），室温下置摇床上振荡1小时，然后置于含抗单克隆抗体（1∶1 000）（整合素β₃抗体是日本Tharming gen 公司出品，货号为2441D的纯抗鼠整合素β₃；ICAM抗体是美国Santa Cruz Biotechnology公司出品，货号为107lotaF307的小鼠单克隆抗体IgG）的封闭液中，4℃过夜。次日用洗涤液1（0.02 mol PBS、pH7.4, 0.5% Tween 20）洗10分钟、3次，洗涤液2（0.05 mol Tris-HCl、 pH7.5, 0.15 mol NaCl）洗10分钟，置于含标记辣根过氧化物酶的羊抗鼠IgG（1∶1 000）的封闭液中，室温下1小时，再用洗涤液2洗10分钟、3次，用二氨基联苯胺作为底物显色，PBS终止。膜晾干后扫描拍照。

4．VDS扫描定量：将免疫印迹法显色好的PVDF膜晾干，即在VDS扫描系统(美国Pharmacia公司产品)上扫描，得到每点的面积扫描定量（mass）值，并换算成单位蛋白浓度(U，mg/L)的mass值。整合素β₃和ICAM目前尚无国际公认的单位，本研究中的单位是为便于半定量比较而设定。

三、统计学方法

结果以±s表示，采用方差分析和t检验。本研究所用免疫印记法是用96孔点杂交仪，每批实验仅能加32份样品，因目前无整合素β₃和ICAM的定量标准品，批间误差较难控制，故仅对同批的实验结果进行统计学分析。

结果

将研究组和对照组标本分3批实验，每批均包括各组标本。3批实验结果趋势相同，取其中1次：7例内异症患者子宫内膜组织7份，9例内异症患者异位内膜组织9份，对照组14例的子宫内膜组织共14份，增生及分泌期子宫内膜各7份。

一、蛋白定量结果

对照组增生期子宫内膜蛋白浓度平均为（33.1±3.7）mg/L，分泌期子宫内膜蛋白浓度平均为（34.2±5.6）mg/L，研究组子宫内膜蛋白浓度平均为（31.6±4.9）mg/L，异位内膜蛋白浓度平均为（31.7±3.6）mg/L，各组间差异无显著性（P＞0.05）。

二、免疫印迹法半定量结果

1．对照组子宫内膜整合素β₃和ICAM蛋白的表达：对照组增生期子宫内膜整合素β₃蛋白平均表达（0.45±0.01）mass值/U，分泌期子宫内膜整合素β₃蛋白平均表达（0.39±0.06）mass值/U，两组差异无显著性（P＞0.05）；对照组增生期子宫内膜ICAM蛋白表达量平均为（0.70±0.20）mass值/U，分泌期子宫内膜ICAM蛋白表达量平均为（0.86±0.34）mass值/U，两者之间差异亦无显著性（P＞0.05）。

2．内异症子宫内膜整合素β₃和ICAM蛋白的表达：内异症子宫内膜均为分泌期子宫内膜，故与对照组分泌期子宫内膜比较。内异症子宫内膜整合素β₃的表达量为（0.33±0.03） mass值/U，与对照组的表达量相比，差异无显著性（P＝0.05）。内异症患者子宫内膜ICAM蛋白的表达量平均为（0.58±0.17）mass值/U,与对照组相比，差异有显著性（P＜0.05）。

3．内异症异位内膜整合素β₃和ICAM蛋白的表达：因异位内膜在病理诊断上均处于增生期，故将异位内膜的检测结果与对照组增生期子宫内膜检测结果比较。异位内膜表达整合素β₃蛋白量为（0.32±0.06）mass值/U，对照组为（0.45±0.10）mass值/U，两者比较，差异有极显著性（P＜0.01）；异位内膜ICAM蛋白表达量为（1.16±0.38）mass值/U，对照组为（0.70±0.20）mass值/U，两者比较，差异有显著性（P＜0.05）。

讨论

一、整合素β₃和ICAM的功能

整合素β₃和ICAM是两种粘附分子，前者是细胞外基质纤维连接蛋白等的受体，与细胞分化、维持细胞形态、细胞间联系有密切关系。ICAM是粘附分子免疫球蛋白家族中的一种，主要存在于白细胞表面，子宫内膜间质细胞也有较多的ICAM^［1］。它对介导细胞-细胞粘附有重要作用。一些细胞因子如肿瘤坏死因子α、白细胞介素1、γ干扰素等，可刺激其活性，而糖皮质激素可抑制其活性，以影响T细胞介导的免疫反应^［2］。这两种粘附分子在肿瘤细胞的生长、转移上已有较多的研究，在内异症方面的研究却较少。而内异症发生学上的种植学说与肿瘤细胞