多肿瘤抑制基因(multiplex tumor suppressor 1, MTS1)的突变和缺失广泛存在于人类多种原发性肿瘤组织及肿瘤细胞株中^{［１，２］}。但MTS1基因在原发性宫颈鳞癌中的变化，国内尚未见报道。本研究采用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)及溴乙锭染色技术，对25例原发性宫颈鳞癌患者的MTS1基因外显子2进行筛查，现将结果报道如下。

一、资料与方法

1.材料：收集湖南省肿瘤医院1996年5月至1996年10月住院行根治性放射治疗的原发性宫颈鳞癌患者25例，在行放疗前用活检钳取下0.3 cm³的肿瘤组织立即放入-70℃冰箱保存备用，同时抽取8 ml外周血液用EDTA抗凝作自身对照。

2.方法：(1)DNA抽提。肿瘤组织和外周血DNA的提取，采用常规蛋白酶K消化、苯酚/氯仿抽提和无水乙醇沉淀法，用TE溶解，0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测抽提结果。(2)PCR扩增目的片段。扩增MTS1的第2个外显子，引物由上海细胞生物学研究所合成，序列为1(S)，5′-GGCTCTACAAGCTT- CCT3′；2(AS)，5′-TCTGAGC- tTTGGAAGCTCT3′。循环参数为：94℃、60秒， 56℃、60秒，72℃、90秒，35个循环后，72℃延伸10分钟。PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭染色检测扩增效果。(3)PCR-SSCP及溴乙锭染色。取PCR扩增效果满意的反应物10 μl，加入甲酰胺10 μl，溴酚蓝2μl混匀，煮沸变性10分钟后立即放入冰盒中。用5%非变性聚丙烯酰胺凝胶(厚1 mm，面积12 cm×14 cm)，30V恒压，1×TBE电泳过夜，溴乙锭染胶30分钟，置紫外灯下观察荧光条带并立即拍照。(4)统计学分析。计数资料采用四格表确切概率法检验。

二、结果

1.宫颈鳞癌中MTS1基因的突变率：本研究采用PCR技术扩增25例宫颈鳞癌组织及其相应的外周血DNA中MTS1基因第2个外显子，扩增效果均满意。采用SSCP溴乙锭染色技术进一步分析PCR产物，25例宫颈鳞癌中有8例突变，突变率为32.0%。

2.MTS1基因突变与宫颈鳞癌临床及组织学分级的关系：(1)年龄。25例宫颈鳞癌患者进院时平均年龄为48.3岁(22～68岁)，其中年龄大于50岁的突变率为36.4%(4/11)，小于等于50岁的突变率为28.6%(4/14)(P＞0.05)。(2)临床分期。采用1985年FIGO临床分期标准，其中Ⅱb期突变率为31.3%(5/16)，Ⅲb期的突变率为2/8(P＞0.05)，Ⅳb期1例，且突变(1/1)。(3)组织学分级。1级1例，无突变；2级18例突变6例；3级6例突变2例。

三、讨论

MTS1基因是定位于9p₂₁区域的一个重要的抑癌基因，由3个外显子和两个内含子构成。它的第2外显子突变是导致其功能失活的主要原因之一^［１］。我们用PCR-SSCP方法检测25例宫颈鳞癌的MTS1第2外显子，突变率为32%(8/25)，结果提示MTS1基因突变与宫颈鳞癌的发生有关，而与患者的年龄、临床分期及组织学分级无关。值得一提的是，MTS1基因变异的检出率与研究方法有关。Cairns等^［２］人于1994年用多重PCR技术分析285例膀胱癌，发现MTS1基因纯合缺失30例。1995年他们采用微卫星多态性标记法(增加了5个新分离的标记物)，分析上述285例膀胱癌，新发现MTS1基因纯合缺失96例。本组病例如用更精确的检测方法，MTS1基因改变的检出率可能会更高。

另外，有学者在胃癌的研究中发现MTS1基因缺失的病例均为有淋巴结转移的进展期胃癌，认为MTS1基因异常可能与胃癌转移有关^［３］。在我们的研究中，也发现1例腹膜后转移的Ⅳb期患者有MTS1基因突变，另1例左闭孔窝饱满的Ⅱb期患者亦有MTS1基因突变。但由于整个研究对象均为接受放射治疗的病例，不能确切检测盆腔淋巴结转移情况，加上病例较少，故MTS1基因突变与宫颈鳞癌转移之间的关系需进一步研究。

参考文献

1 Kamb A, Gruis NA, Jane wF, et al. A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types. Science, 1994, 264:436-440.

2 Cairns P, Polascik TJ, Eby Y, et al. Frequency of homozygous deletion at P16/CDKN2 in primary human tumours. Nature Genetics, 1995,11:210-212.

3 吕有勇，高崇峰，崔建涛，等.胃癌中MTS1/P16基因缺失及表达异常的研究.中华肿瘤杂志，1996，18：189-191.

(收稿：1997-03-04 修回：1997-10-20)