中华妇产科杂志2000年第35卷第4期

朱国平周莹 宁波 孙苒 方菲

摘要目的：探讨安全、有效的对人类白细胞抗原(HLA)共有抗原增大的原因不明性习惯性流产(UHA)患者的免疫治疗方法。方法：采用丈夫静脉血的B淋巴细胞使24例 UHA的患者免疫化。结果：24例 UHA患者中有22例HLA共有抗原增大。 uHA患者中免疫治疗前抗父体的淋巴细胞毒性抗体(APCA)阳性率是8%(2/24)，免疫治疗3个月后APCA阳性率是75%(18/24)，28例对照者的APCA阳性率是86%(24/28)；UHA患者治疗前的APCA阳性率与对照组比较，差异有显著性（P＜0.05）；UHA患者治疗前后APCA阳性率比较，差异有显著性（P＜0.05）。UHA患者免疫治疗后妊娠率为80%(16/20)。免疫治疗后出生的新生儿无低体重儿及畸形儿。结论：丈夫B淋巴细胞具有使妻子免疫化及提高妊娠成功率的作用，也具有降低不良反应的可能。

关键词：流产，习惯性B淋巴细胞免疫治疗

我院妇产科自1996年1月至1999年 5月共收治原发性原因不明性习惯性流产患者24例，均给予免疫治疗，现报道如下。

资料和方法

一、研究对象

为1996年1月至1999年5月在本院就诊，月经规律、血沉正常、抗核抗体及抗红细胞凝集抗体阴性，无染色体异常，无解剖、内分泌、感染等病因的原发性原因不明习惯性流产患者24例（流产组）。年龄24～40岁，平均年龄 27岁；流产时孕周为5～10周，平均孕周6.5周；流产次数为3～6次，平均3.8次。选择同期在本院就诊，年龄相当，有过足月分娩史的妇女28例为对照组。

二、方法

1.一般情况了解：详细询问患者的现病史、过去史、月经史、生育史、家族史及配偶的一般情况。

2.常规检查：行妇科、夫妻染色体、盆腔B型超声、宫腔镜检查，必要时行腹腔镜检查；记录基础体温，行诊断性刮宫；宫颈粘液检查（包括淋病奈琴氏菌、支原体、衣原体），阴道细胞涂片，性激素6项（黄体生成素、促卵泡激素、雌二醇、孕酮、泌乳素、睾酮）及三-碘甲腺原氨酸、游离甲状腺素测定等，排除原因明确的习惯性流产。采用聚合酶链反应（PCR）技术行人类白细胞抗原(HLA)的类型检测，凡共享 hLA位点两个或以上者为夫妻HLA相容性增大，否则为HLA相容性未增大，并与对照组的HLA情况相比较。24例患者均在实施免疫治疗前及治疗3个月后各行 1次抗父体的淋巴细胞毒性抗体(APCA)检测。APCA检测采用妻子血清与丈夫淋巴细胞孵育后染色镜检，计数死亡淋巴细胞以定性的方法。观察并记录新生儿出生时的孕周、体重及有无畸形。

3.免疫治疗：采用无菌法，取丈夫静脉血20 ml加入适量肝素钠抗凝。按1∶1的方式取淋巴细胞分离液20 ml，将分离液放于试管的下部,将血液置于淋巴细胞分离液的上方，5000～6 000 r/min离心15 min，排出血清层吸取中间淋巴细胞层液，加生理盐水20 ml混匀，将该液再按上述方法离心、洗涤3次。将淋巴细胞分离液分离的淋巴细胞移入尼龙毛柱，37℃下孵育30 min后，洗去T淋巴细胞，然后挤压洗下B淋巴细胞，无菌生理盐水离心洗涤3次，计细胞数，调整B淋巴细胞数达2～3×10⁷个/ml，用该液3 ml给患者做皮内注射。取患者前臂内侧为皮内注射区，每侧纵列5个点，每月注射1次，连续3个月，妊娠后再同法免疫治疗3次。如果半年内未孕，则再行3次治疗。课题组人员固定；接受本免疫疗法者不接受对该病的其他治疗。

三、统计学方法

所有资料均采用χ²检验。

结果

一、流产组患者 HLA共有抗原情况

流产组患者夫妻HLA相容性抗原增大者 22例，未增大者为2例；对照组增大者5例，未增大者为23例。两组比较，差异有显著性（P＜0.05）。

二、免疫治疗前后APCA情况比较

治疗前，流产组APCA阳性者2例，阴性者22例，阳性率8%；对照组阳性者24例，阴性者4例，阳性率87%。两组间差异有极显著性(P＜0.01)。

治疗后，流产组患者APCA阳性者 18例，阴性者 6例，阳性率75%，与治疗前间差异有显著性(P＜0.05)。

三、流产组患者治疗后妊娠情况

流产组经免疫治疗后，再次妊娠者 20例，其中 16例获得妊娠成功(16/20)，成功率为80%，该16例新生儿体重为2.5～3.6 kg，平均体重为2.9 kg；对照组新生儿出生体重为2.5～3.8 kg，平均体重为2.9 kg。两组比较，差异无显著性(P＞0.05)。经免疫治疗后妊娠成功的新生儿中无畸形儿。

讨论

习惯性流产的病因非常复杂，不明原因性习惯性流产又在该类疾病中占40%～70%，因此，对于原发性不明原因性习惯性流产的诊断和治疗是诊治该类疾病的重要内容之一。

根据生殖免疫学观点，原发性不明原因性习惯性流产可能是由于胚胎抗原的免疫低反应性所致。即患者由于对胚胎同种异体抗原无法产生足够的封闭抗体而使胚胎得不到免疫防护而流产^［1］。本研究表明，HLA与不明原因性习惯性流产存在着一定的关系，其机理可能是双方HLA不相容性过弱，不能产生胎儿保护性抗体而使胎儿流产所致^［2］。目前，国内外已有采用少量输血、混合淋巴细胞注射及巨细胞注射等方法进行免疫治疗的报道。本研究根据国内外的经验，采用丈夫血的B淋巴细胞给妻子行主动免疫治疗，以提高患者的免疫反应性^［3］，获得对该类患者的治疗成功。该方法的采用亦有利于避免母亲对红细胞或血小板等抗原致敏的危险。

临床研究结果亦表明，未行主动免疫治疗前，流产组由于 hLA共有抗原的增大，患者体内产生APCA的能力低下，致抗体的形成极少，使胎儿易受母体细胞免疫应答的攻击，发生母体免疫系统排斥胎儿的反应，导致流产^［4］。用丈夫的 b淋巴细胞作为抗原，对妻子进行主动免疫治疗3个月后，患者APCA的阳性率明显增高。主动免疫治疗使妻子体内的APCA及其他封闭抗体形成增多，使胎儿不易受母体免疫系统的排斥，胎儿形成耐受，因而可在母体环境中存活下来，使妊娠的成功率得到提高(80%)。主动免疫治疗后无低体重儿及畸形儿，母亲亦无因治疗而发生一些新的免疫学方面及传染病方面的疾病。提示，应用丈夫 b淋巴细胞对妻子行主动免疫治疗，适用于夫妻间HLA相容性增大的原因不明性习惯性流产的治疗，有针对性强、较混合性淋巴细胞治疗副作用少的优点。当然，要做出确切的结论还有待于今后的继续观察及实验。

作者单位：朱国平（广州市东山区人民医院妇产科510080)

周莹（广州市东山区人民医院妇产科510080 )

孙苒（检验科)

方菲（检验科)

宁波（中山医科大学免疫教研室）

参考文献

1林其德，赵爱民，周涵春,等.原发性习惯性流产的主动免疫治疗. 中华妇产科杂志， 1996,31: 351-356.

2 毕爱华，龚非力. 医学免疫学. 北京: 人民军医出版社, 1995.160-162.

3 Cauchi MN, Lim D, Young DE, et al. Treatment of recurrent aborters by immunization with paternal cells :control trial. Am J Reprod Immunol, 1991, 25:16-17.

4 罗丽兰. 免疫生殖学. 武汉: 湖北科学技术出版社, 1998.75-89.

学技术出版社, 1998.75-89.