内皮素(ET)是一种主要由内皮细胞分泌的肽类物质，具有强效的血管收缩作用，其中ET-1的缩血管作用最强。近年发现ET对缺血性急性肾衰竭的发生、发展起重要作用。本文研究肾缺血再灌注损伤对肾组织ET-1和ET受体基因mRNA转录调节的影响。

材料和方法 健康成年SD大鼠36只，苯巴比妥钠40mg/kg腹腔麻醉。腹部正中切口，游离左侧肾蒂，用无创动脉夹夹闭左肾动脉40分钟，然后再灌注0、2、6、24小时及2、7天，右肾作为对照(每一时间点n＝6只)。异硫氰酸胍一步法提取肾组织总RNA，以1μg RNA为模板，使用ET-1、ET受体A和B(ET_Ａ、ET_Ｂ)特异性引物^〔1〕，并以β-actin基因作为内参标准，半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增ET-1mRNA、ET_Ａ和ET_Ｂ mRNA。扩增后的目的片长ET-1 319bp，ET_Ａ和ET_Ｂ分别为954bp和742bp。取15μl PCR产物2%琼脂糖凝胶电泳1小时，紫外拍照后，胶片进行图像分析读取光密度值。用同一标本的β-actin产物光密度值校正各目的基因的光密度值。将同一时间点左、右肾校正值的均数进行非配对t检验，P＜0.05有统计学意义。

结果 (1)再灌注2、6、24小时左肾相对ET-1 mRNA水平分别为右肾的3.32，3.74和2.76倍(P＜0.05)。再灌注0小时、2、7天左肾ET-1 mRNA虽较对照肾增高，分别为右肾的1.24，1.57和1.30倍，但无统计学意义；(2)再灌注2、6小时左肾ET_Ａ和ET_Ｂ mRNA水平分别为右肾的2.84、2.14和2.68、4.11倍(P＜0.05)。再灌注0、24小时和2、7天左，右肾ET_Ａ和ET_Ｂ基因mRNA水平无显著差异。

讨论 研究发现^〔2〕肾内输内抗ET-1单克隆抗体可明显改善因肾缺血造成的肾功能和组织形态学变化；ET受体拮抗剂也能显著改善缺血性ARF的严重程度。本文结果显示大鼠左肾缺血40分钟，再灌注2小时，缺血肾ET-1 mRNA水平即较对照肾增高2.3倍，而且缺血后7天仍未降至对照肾水平。文献^〔3〕报道大鼠一侧肾缺血45分钟，再灌注2、6小时，缺血肾ET-1 mRNA较对照肾增高2.33和2.66倍，且缺血后7天仍为对照肾的1.44倍，说明短暂的肾组织缺血可迅速增加ET-1 mRNA水平，并能诱导该基因持续表达。ET受体分为ET_Ａ和ET_Ｂ两种亚型。研究发现在甘油引起的大鼠ARF中，肾髓质和皮质ET_Ａ和ET_Ｂ基因mRNA水平显著增加，尤以髓质ET_Ｂ受体的上调更为明显^〔4〕。本文结果也显示大鼠肾缺血后2小时，缺血肾组织ET_Ａ和ET_Ｂ基因mRNA水平即比对照肾增高1.84和1.68倍，且在缺血后6小时ET_Ｂ上调幅度大于ET_Ａ。

本文结果表明肾缺血再灌注可引起肾组织ET-1基因和ET受体基因mRNA转录水平增高，ET系统参与了缺血性ARF的病理生理过程。

参 考 文 献

1 Elton TS，Oparil S，Taycor GR，et al．Normobric hypoxia stimulates endothelin-gene expression in the rat．Am J Physiol，1992，32：R1260．

2 江伟，徐惠芳.内皮素：一种新的内皮源性强效血管收缩肽.国外医学麻醉学与复苏分册，1996，17：68.

3 Firty JD，Ratcliffe PJ．Organ distribution of the three rat endothelin messenger RNAs and the effects of ischemia on renal gene expression．Clin Invest，1992，90：1023．

4 Roubert P，Cornet S，Plas P，et al．Upregulation of renal endothelin receptors in glycerol-induced acute renal failure in the rat．J Cardiovasc Pharmacol，1993，22：S303．

(收稿：1997-08-11 修回：1997-12-03)