关键词： 一氧化氮合酶抑制剂；高血压；心血管重构；血管紧张素Ⅱ；血管紧张素转化酶抑制剂

摘要:目的：探讨一氧化氮（NO）缺乏所致高血压、心血管重构的作用及机理。

方法：Wistar大鼠，经饮水给予不同药物，如下分组：对照组（C组）：仅给予饮水；NO合酶抑制剂组（L组）：L-NAME 50 mg/kg.d^-1；大剂量培哚普利组（L+HA组）：L-NAME 50 mg/kg.d^-1+培哚普利4 mg/kg.d^-1 ；小剂量培哚普利组（L+LA组）：L-NAME 50 mg/kg.d^-1+培哚普利0.4 mg/kg.d^-1。每两周监测血压一次（尾袖法）。8周后，颈动脉插管测定动脉压、采血样、摘取心脏，测定心脏湿重及室壁厚度，用病理及体视学方法测定心肌细胞大小、血管中膜厚度、血管周围纤维化程度、管壁厚度/腔径比、管壁面积/腔径等心血管重构指标。测定血浆及组织中NO、内皮素-1（ET-1）、血管紧张素AngⅠ、 angⅡ、血管紧张素转换酶（ACE）含量或活性。

结果：L组大鼠血压明显升高、心血管系统出现明显重构改变，血浆中NO含量降低，ET、Ang I 含量增高；心肌组织中NO含量降低，ACE活性、AngⅡ、AngⅠ含量增高。经大剂量培哚普利（4 mg/kg.d^-1）干预后，血压得到控制，心血管重构及血液、心肌中的生化指标得到改善，与对照组相比无明显差异。小剂量培哚普利（0.4 mg/kg.d^-1）对血压无明显影响，但心室重构得到一定程度的改善。

结论：本研究证实，抑制NO合成可引起血压升高和心血管重构。血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)能使心血管重构得到改善，说明在该模型中，心肌局部组织中的肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAS）参与了心血管重构的形成过程。

中图分类号：R544.1;Q513;Q753文献标识码：A

文章编号：1006-2866(2000)11-0349-06

The Effects of Nitric Oxide Deficiency on Hypertension and Cardiovascular Remodeling

YAN Ding-hongCHENG Xiao-shuWANG Xue-mei

(Department of Cardiology, The Second Affiliated Hospital of Jiangxi Medical College, Nanchang 330006,China)

Abstracts:Objective: To investigate the mechanisms of nitric oxide deficiency induced by chronic administration of L-NAME on hypertension and cardiovascular remodeling.

Methods:Male normotensive Wistar-Kyoto rats (n=32) were divided into four groups and given different drugs via drinking water for 8 weeks. Group C(n=10): received only tap water; group L (n=10): L-NAME 50 mg/kg.d^-1; group L+HA (n=6): L-NAME 50 mg/kg.d^-1+peridopril 4 mg/kg.d^-1; group L+LA (n=6): L-NAME 50 mg/kg.d^-1+ peridopril 0.4 mg/kg.d^-1. Tail cuff blood pressure (BP) was measured every two weeks. After 8 weeks, arterial pressure measurement and blood collection through carotid artery were performed. Than,the hearts were removed,weight measured; the ratio of left ventricular mass(LVM) to the body weigh and mean left ventricular wall thickness (LVWT) were determined. Pathologic and stereologic measurements were carried out to determine: the diameter of cardiac myocyte; the lumen(R) and wall area(WA) of small artery; WA/R ratio; and the degree of vascular fibrosis. Myocardial and plasma NO、ET、AngⅠ、AngⅡ、ACE.

Results：Group L had higher systolic blood pressure, LVM/BM and mean LVMT,which proved the development of the left ventricular hypertrophy(LVH). The concentrations of NO in myocardium and plasma were lower, but ET-1, AngⅠ were higher in group L than in other groups. The activity of ACE was higher in myocardium but lower in plasma in group L than that in other groups. High dose(4 mg/kg.d^-1) reduced the BP and improved the process of cardiovascular remodeling(CR), lower doses of peridopril(0.4 mg/kg.d^-1) improve the degree of CR as well even the BP remained unchanged.

Conclusions:The study confirmed that inhibiting NO production lead to hypertension and cardiovascular remodeling. Angiotensin-converting enzyme inhibitor(ACEI) could improve CR, which proved that the renin-angiotensin system(RAS) in myocardial tissue involoved in cardiovascular remodeling caused by NO-deficient.

Key words:NOS inhibitor;hypertension;cardiovascular remodeling;angiotension Ⅱ;ACE inhibitor

高血压是严重危害人类健康的常见病、多发病，可导致心、肾、脑等靶器官损害。高血压所致的心血管系统重构是其死亡率增加的独立危险因素。已知内皮源性弛缓因子-一氧化氮（NO）具有扩张血管、抑制氧源性自由基产生、防止白细胞粘附于血管壁及抑制血管增生等多种作用^［1］。临床观察发现，高血压病患者的内皮细胞依赖性血管弛缓反应明显低下、血浆NO浓度降低^［2］。动物实验研究初步表明，当持续性给予大鼠NO合酶抑制剂后，动物出现血压升高、冠脉微小血管中膜肥厚、血管周围纤维化、心肌肥大、心肌坏死及纤维化等心血管系统重构（remodeling）病变^［3］。机体许多组织内均存在肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAS）,该系统在组织局部产生的生理活性物质血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）与高血压的血管壁增厚、动脉硬化、心肌肥大等心血管病变的形成有着重要关系^［4,5］。然而，在NO产生障碍所致心血管系统重构的形成中，RAS的作用尚不清楚。本研究的目的在于探讨RAS在长期慢性投予NO合酶抑制剂（L-NAME）所造成的高血压、心血管系统重构中的作用，并观察血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）干预的效果。

对象与方法：

1实验试剂与仪器：L-硝基-精氨酸甲酯（L-NAME Sigma公司），培哚普利（商品名为雅施达，由法国施维雅药厂提供），血管紧张素（Ang）Ⅰ、AngⅡ测试盒（北京北方生物技术研究所），血管紧张素转化酶（ACE）测试盒（北京海军总医院），内皮素（ET）测试盒（东亚免疫技术研究所），NO测试盒（南京建成生物工程研究所），SXY821型大鼠尾动脉测压仪（湖南医科大学电子仪器厂），RM-6000型四导生理记录仪（日本光电公司），751-GM紫外分光光度计（上海惠普分析仪器有限公司），SN-682γ闪烁计数器（上海核福光电仪器有限公司）等。

2 实验动物及分组：同龄雄性Wistar大鼠，体重320±30克（江西医学院实验动物部），每笼一只，标准颗粒料饲养，自由取水，明/暗各12小时。所有大鼠均先饲养1周适应环境，记录日饮水量。按统计学方法将大鼠随机分组，L-NAME溶入水中投喂，培哚普利粘于奶粉中口饲，按相应要求每日定时定量投喂，共饲养8周。实验分组如下：（1）对照组（C组）：仅给予饮水（n=10）；（2）NO合酶抑制剂组（L组）：L-NAME 50 mg/kg^．d^-1（n=10）；（3）大剂量培哚普利组（L+HA组）：L-NAME 50 mg/kg^．d^-1+培哚普利4 mg/kg^．d^-1（n=6）；（4）小剂量培哚普利组（L+LA组）：L-NAME 50 mg/kg+培哚普利0.4 mg/kg^．d^-1（n=6）。

3实验方法及步骤：每两周测定体重及外周动脉血压（尾袖法），8周后用4%戊巴比妥钠按40 mg/kg腹腔麻醉后，分离颈动脉,行颈动脉插管抽取血液共8 ml用于测定AngⅠ、 AngⅡ、ACE、ET、NO。在体条件下行各器官生理盐水灌洗，摘取心脏、主动脉。心尖部分按9ml/克比例用冷生理盐水行组织匀浆制备，测定心肌中NO、ACE 、AngⅠ、AngⅡ的含量或活性。其余部分用10%福尔马林固定，用作心血管系统病理及体视学检测。

4检测项目及方法:

4.1生化指标测定:

4.1.1血液及心肌中AngⅠ、AngⅡ测定：冰浴下在15分钟内，1 ml非抗凝血或心肌匀浆中先后加入0.34 M 8-羟基喹啉50 μl、0.3M EDTA二钠 50 μl和0.32 mol二巯基丙醇25 μl，2000转/分低温离心5分钟，留血清于-20℃保存，用¹²⁵I标记后，γ闪烁计数器测定AngⅠ及 AngⅡ，具体操作按试剂盒。

4.1.2血浆ET-1测定：冰浴下在15分钟内，1 ml血液中加入10%EDTA二钠15 μl和抑肽酶20 μl，2000转/分低温离心5分钟，留血清于-20℃保存，用¹²⁵I标记后，在γ闪烁计数器上测定ET-1，具体操作按试剂盒。

4.1.3血浆及心肌NO测定：用硝酸还原酶法测定NO（λ=550）含量， NO测定要除以样品的g蛋白/L，具体操作按试剂盒。

4.1.4血浆及心肌ACE测定^［6］：马尿酸甘氨酰甘氨酸在血管紧张素I转化酶（ACE）的作用下水解成马尿酸及甘氨酸。用乙酸乙酯提取马尿酸，溶于氯化钠中，采用紫外分光法（λ=228）测定马尿酸量