关键词： 血管紧张素Ⅱ；内皮素；自发性高血压大鼠

摘要目的：探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、内皮素（ET-1）对SHR、WKY VSMC增殖的作用。

方法：贴块法培养SHR、WKY VSMC，用³H-TdR参入和细胞计数反映VSMC增殖情况。

结果：SHR、WKY VSMC ³H-TdR参入随AngⅡ、ET-1浓度的增加而增加，呈剂量依赖性。10^-7mol/L AngⅡ、ET-1使SHR VSMC³H-TdR参入提高到对照组的1.9、2.7倍，WKY VSMC ³H-TdR参入提高到对照组的1.3、1.6倍。AngⅡ不促使SHR、WKY VSMC增生。10^-7mol/L ET-1分别使SHR、WKY VSMC细胞数增加209±27%、97±13%。10^-7mol/L AngⅡ和ET-1则使SHR、WKY VSMC³H-TdR参入提高到对照组的7.0、4.2倍，细胞数增加3.0、1.3倍。

结论：AngⅡ、ET-1对VSMC的增殖有协同效应。高血压时，VSMC对促生长因子敏感性增加，更易发生肥大增殖。

中图分类号：R544.1;Q2-33文献标识码：A文章编号：1006-2866(2000)06-0176-02

The Proliferative Effect of Angiotensin

Ⅱ and Endothelin on The

Vascular Smooth Muscle Cells from SHR

WANG Xiang-yu,WU Ke-gui,XU Chang-sheng,et al

(Hypertension division, the first affiliated hospital

of FuJian medical university 2 Anatomy division,

FuJian medical university, Fuzhou 350005,China)

ABSTRACTAim:to explore the proliferative effect of angiotensin Ⅱ(AngⅡ), endothelin-1 (ET-1) on the aortic smooth muscle cells (VSMC) from SHR and WKY.

Methods:VSMC were cultured by explant method. Proliferation of VSMC was assessed by³H-TdR incorporation and cell number.Results:³H-TdR incorporation of VSMC from SHR and WKY were increased , dependent of the concentration of AngⅡ and ET-1.³H-TdR incorporation of VSMC from SHR were increased 0.9,1.7 times by 10^-7mol/L AngⅡ, ET-1 respectively.³H-TdR incorporation of VSMC from WKY were only increased 0.3, 0.6 times. AngⅡ did not induced hyperplasia of VSMC. The cell number of VSMC from SHR and WKY were increased 209±27%, 97±13% by 10^-7 mol/L ET-1, respectively.³H-TdR incorporation of VSMC from SHR and WKY were increased 6.0, 3.2 times, The cell number of VSMC from SHR and WKY were increased 3.0, 1.3 times by 10^-7 mol/L AngⅡ and 10^-7 mol/L ET-1.

Conclusions:AngⅡ and ET-1 had synergistic effect on the proliferation of VSMC. VSMC from SHR were sensitive to growth factors and inclined to hypertrophy and hyperplasia.

Key Words:angiotensin Ⅱ;endothelin;SHR

高血压是一种以血管平滑肌细胞增殖为主要病变的疾病。血管内皮细胞（VEC）和平滑肌细胞（VSMC）能合成和分泌多种血管活性物质。这些血管活性物质参与了VSMC的正常生长和分化的调控，使VSMC保持相对静止的非增殖状态。高血压时，生长促进因子和生长抑制因子之间的平衡被打破，VSMC表现为肥大或增生^［1］。VSMC体内的增殖状态可能受压力因素、神经递质、各种生长因子和血管活性物质的多因素调控^［2］。为排除体内因素的影响，本研究采用体外培养的方法，探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、内皮素（ET-1）对SHR、WKY VSMC增殖的作用。

对象与方法

1 血管平滑肌细胞培养^［3］:

取20周龄雄性SHR、WKY大鼠各8只（本院动物室提供），尾动脉血压分别为218±16、124±13 mmHg。无菌操作下取出胸主动脉，在含15%胎牛血清（FCS，杭州四季青公司）的RPMI培养液中和37℃、5%CO2条件下，用贴块法进行VSMC原代培养，用3-5代细胞进行实验。

2 AngⅡ、ET-1促SHR、WKY VSMC增殖的作用:

将细胞调成一定数目，移入24孔板，每孔1ml，24h后，用无血清RPMI培养48h，使VSMC处于G₀/G₁期，以后进行实验。

实验分组：a.对照组(SF);b.不同浓度AngⅡ组（10^-9～10^-6mol/L，Sigma);c.不同浓度ET-1组（10^-9～10^-6mol/L，Sigma）;d.AngⅡ（10^-7mol/L）+ ET-1（10^-7mol/L）组。

³H-TdR参入：每孔细胞数10⁵个。药物、1μCi³H-TdR和细胞共育30 h, 0.45μm微孔滤膜负压抽滤，滤膜烘干后置入闪烁杯中，加入PPO/POPOP/二甲苯闪烁液4ml，静置过夜后在液体闪烁计数器（FJ 2115，国营262厂）上进行放射性强度测定。

细胞计数：每孔细胞数6×10⁴个。共育3天后行细胞计数。

3 统计方法:

每次实验重复3次。实验结果表达为均数±标准差。各组数据间显著性检验用ANOVA方差分析。P〈0.05有显著意义。

结果

SHR、WKY VSMC³H-TdR参入随AngⅡ、ET-1浓度的增加而增加，呈剂量依赖性。10^-7mol/L angⅡ、ET-1使SHR VSMC³H-TdR参入提高到对照组的1.9、2.7倍，WKY VSMC³H-TdR参入提高到对照组的1.3、1.6倍（图1）。

AngⅡ不促使SHR、WKY VSMC增生。ET-1则促使SHR、WKY VSMC增生。10^-7mol/L ET-1分别使SHR、WKY VSMC细胞数增加209±27%、97±13%（图2）。

AngⅡ、ET-1促SHR VSMC肥大增殖的作用强于WKY。AngⅡ、ET-1对SHR、WKY VSMC的增殖有协同作用。10^-7mol/L AngⅡ和ET-1则使SHR、WKY VSMC³H-TdR参入提高到对照组的7.0、4.2倍，细胞数增加3.0、1.3倍（图3，4）。

Fig 1 AngⅡ,ET-1 stimulated³H-TdR incorporation ofVSMC from SHR and WKY. n=8, Hotelling T² testP＜0.01, SHR AngⅡ vs WKY AngⅡ, SHR ET vs WKY ET

Fig 2 ET-1 induced hyperplasia of VSMC from SHR and WKY. n=8, Hotelling T² test, P＜0.01, SHR vs WKY.

Fig 3 The synergistic effect of Ang Ⅱ, ET-1 on ³H-TdR incorporation of VSMC from SHR and WKY. n=8, a:P＜0.01 vs SHR AngⅡ+ET. b:P＜0.01 vs WKY AngⅡ+ET.

Fig 4 The synergistic effect of Ang Ⅱ, ET-1 on cell number of VSMC from SHR and WKY. n=8, a:P＜0.01 vs SHR AngⅡ+ET. b:P＜0.05 vs WKY AngⅡ+ET.

讨论

动脉血管壁VSMC增殖肥厚和功能改变在高血压的形成和维持中起着重要作用。有多种生长因子参与VSMC的增殖。生长因子之间有相互促进和制约的作用，共同形成一个广泛而复杂的化学调节网络，调节心血管机能。最近越来越学者强调AngⅡ和ET-1的作用，并认为AngⅡ和ET-1主要通过旁分泌、自分泌、胞内分泌，作为局部激素发挥作用^［4］。心血管局部存在独立的肾素-血管紧张素系统（RAS）。SHR大鼠循环RAS处于正常或低于正常的状态，但局部RAS处于激活状态，表现为组织血管紧张素转换酶（ACE）和AngⅡ活性增高，且SHR VSMC对AngⅡ表现出高反应^［5，6］。ET-1是迄今所知的体内作用最强的缩血管物质，也是VSMC的增殖因子。与AngⅡ相似，高血压时循环ET-1水平多正常或低于正常，但血管组织内ET-1显著增高^［7］。但SHR VSMC是否对ET-1表现出高反应，AngⅡ和ET-1是否对VSMC的增殖具有协同效应，尚不清楚。我们的研究结果表明：AngⅡ仅使SHR、WKY VSMC肥大而不增生，ET-1则促使其增生。AngⅡ、ET-1对SHR VSMC促肥大增生效应强于WKY。AngⅡ、ET-1对大鼠VSMC增殖效应有协同作用。进一步证实高血压时VSMC对促生长因子敏感性增加，更易发生肥大增殖，导致外周血管重塑。

参考文献

［1］ 李<