同济医科大学学报2000年第29卷第4期

胡本容林先明向继洲曹圣

摘 要:血管紧张素Ⅱ1型(AT1)受体基因突变体A1166C (碱基A被C取代)可能与原发性高血压的发生有关，但目前的研究结果并不一致。利用对靶基因的PCR扩增片段进行酶切的方法对武汉地区103例汉族人AT1受体基因多态性(A1166C)与原发性高血压发生的关系进行了分析，发现正常人和原发性高血压患者两组间A1166C基因型频率分别为40 %和62 % (χ²=4.95, P＜0.05)。初步结果表明，被检测者中A1166C在原发性高血压患者和正常人两组间有显著性差异。

关键词：AT1受体；基因多态性；原发性高血压

近年来，国外资料报道，AT1受体基因3/-非编码区A1166C(碱基A被C取代)与许多心血管疾病的发生有关，包括原发性高血压、心肌梗死、冠心病等，但不同学者对不同人种所得研究结果并不一致^［1～3］。本文就武汉地区汉族人AT1受体基因A1166C与原发性高血压的关系作初步探讨，以认识汉族人种AT1受体基因多态性在原发性高血压发病中的作用。

1对象与方法

1.1受试对象

原发性高血压组： 原发性高血压患者58例，男35例，女23例，民族：均为汉族，年龄（56.4±7.8）岁，BMI（25.3±1.7）kg/m²。高血压患者入选标准：(1)确诊高血压：已诊断为高血压且长期接受抗高血压药物治疗，未接受治疗者，不同日3次测量血压，舒张压12.66 kPa，收缩压21.33 kPa；(2) 排除继发性高血压。

正常人组：正常人45例，男26例，女19例，民族：均为汉族，年龄（50.0±15.1）岁，BM i（23.3±2.4）kg/m²。血压正常，无高血压病史。

1.2AT1受体基因多态性分析

1.2.1外周血染色体DNA的提取：肝素抗凝全血1ml，分别用红细胞裂解液和白细胞核裂解液处理，再用蛋白酶K消化，TE饱和酚和氯仿抽提染色体DNA。

1.2.2聚合酶链反应(PCR)：A1166C突变位点位于AT1受体基因3′-非编码区。据此设计以下引物序列^［4］：上游引物(1028-1047),5′-ATAATGTAAGCTCATCCACC-3′, 下游引物(1359-1378),5′-GAGATTGCATTTCTGTCAGT-3′(由上海生工工程公司合成)。PC R反应体积100 μl，其中染色体DNA 200 ng，引物各30 pmol，dNTP(上海生工工程公司)各200 μmol，TaqDNA聚合酶(上海生工工程公司)3.0 U，10(buffer 10 μl，MgCl₂2.0 mmol。94 ℃变性10 min后，94 ℃ 45 s变性，55 ℃ 1 min复性，72℃ 90 s延伸进行35次 循环。

1.2.3突变位点的酶切分析：PCR产物经TE饱和酚和氯仿抽提后，用无水乙醇沉淀，灭菌双蒸水溶解。用DdeI(美国Gibco公司)进行酶切，分析突变位点。酶切产物置于30 g/L琼脂糖凝胶上进行电泳，溴化乙锭染色，在紫外灯下观察结果。

1.3统计学处理

组间基因型频率比较用χ²检验。

2结果

2.1DdeI酶切结果

DdeI可识别序列为CTNAG，PCR扩增产物片段长度为351 bp左右。如1166位碱基为C，则扩增片段中具有该序列，如为A则没有该序列。因此，PCR扩增产物经DdeI处理后,只在351 b p处有一条条带的为没有突变的纯合子A1166，在202 bp和149 bp处各有一条条带的为突变的纯合子C1166，而杂合子基因型A1166C在351, 202, 149 bp处各有一条条带（见图1）。

图1DdeI酶切电泳结果

2.2不同组间A1166C基因型频率的比较

原发性高血压患者和正常人两组间出现A1166C基因型频率分别为62%和40%,χ²检验有显 著性差异(χ²=4.95 , P＜0.05)。不同性别组间出现A1166C基因型的频率，男性为49%，女性为57%，χ²检验没有显著性差异(χ²=0.63, P＞0.10)。

3讨论

AT1受体基因位于3号染色体长臂（3q），通过PCR-SSCP分析60例高血压患者AT1R基因的编码区和3′-非编码区，发现有5个突变位点(T573C，A1062G，A1166C，G1517T和A1878G)，仅有A1166C与原发性高血压的发生有关^［1］。Wang WY通过对108例有高血压病家族史，早期发病的原发性高血压患者进行研究也得出了同样的结论^［5］。但并不是所有的研究都得到了肯定的结论，Schmidt S认为A1166C与原发性高血压的发生无关，且年龄大于50岁的原发性高血压患者A1166C有降低的趋势^［3］。本研究也观察了武汉地区103例汉族人AT1R基因A1166C与原发性高血压发生的关系，发现正常人和原发性高血压患者两组间出现A1166C基因型频率有显著性差异，对于不同性别，两组间出现A1166C基因型频率没有显著性差异。

原发性高血压是多基因相关疾病，在研究AT1受体基因多态性与原发性高血压的关系时，除了地区，种族的差异外，还受受试者的年龄、性别、体表指数、有无高血压病家族史等因素的影响。这也可能是以前的研究得出不同结论的原因。本研究收集样本时，保持原发性高血压患者和正常人两组间年龄、体表指数等因素齐同，尽量避免了这些因素对实验结果的影响。AT1R基因（A1166C）突变与原发性高血压的关系尚不清楚，其多态性只是作为一种标志， 提示其连锁基因可能参与原发性高血压的发病^［6］。阐明A1166C与原发性高血压发生的关系及其在高血压发病中的作用，还需进一步研究。

卫生部科研基金资助项目（98-2-092)

胡本容，女，1954年生，主管技师胡本容（同济医科大学基础医学院药理学教研室，武汉430030）林先明（同济医科大学基础医学院药理学教研室，武汉430030）向继洲（同济医科大学基础医学院药理学教研室，武汉430030）曹圣（同济医科大学卫生部呼吸系疾病重点实验室，武汉430030）

参考文献

1，Bonnardaux A, davies E, Jeunemaitre X et al. Angiotensin Ⅱ typ e 1 receptor gene polymorphisms in human essential hypertension. Hypertension , 1994 , 24： 63

2，Benetos A, Topouchian J, Ricard S et al. Influence of angiotens in Ⅱtype 1 r eceptor polymorphisms on aortic stiffness in never-treated hypertensive patient s. Hypertension, 1995, 26：44

3，Schmidt S, Beige J, Walla-Friedel M et al. A polymorphism in the gene for t he angiotensin Ⅱ type 1 receptor is not associated with hypertension. J hyperte nsion , 1997, 15： 1385

4，Tiret L, Bonnardeaux A, Poirier O et al. Synergistic effect of angiotensin-converting enzyme and angiotensin Ⅱ type 1 receptor gene polymorphism on risk of myocardial infarction. Lancet, 1994, 344： 910

5，Wang W Y. Association of angiotensin Ⅱ type 1 receptor gene polymor phism with essential hypertension. Clin Genet, 1997, 51： 31

6，Berge K E, Bakken A, Bohn M et al. A DNA polymorphism at the ang iote nsinⅡ type 1 receptor (AT1R) locus and myocardial infarction. Clin Genet, 1997 ,52： 71