抗氧化剂和NFKB对大鼠肺微血管内皮细胞iNOS表达的影响
2022-07-29
来源：求医网
目的探讨NFKB以及抗氧化剂在大鼠肺微血管内皮细胞中对TNFα加LPS诱导的iNOS基因表达的作用及其机制。方法通过免疫组化染色ABC法用抗内皮细胞抗体CD31对培养的大鼠肺微血管内皮细胞进行鉴定。Griess法测定细胞培养上清液中的亚硝酸盐浓度以反映NO的生成。Northernblot结合RT-PCR分析iNOSmRNA水平。EMSA法测定细胞核内NFKB的结合活性。结果TNFα（100μ/ml）加LPS（1μg/ml）处理内皮细胞2小时后iNOSmRNA水平明显上升（P＜0.05），24小时后能明显增加NO的生成（P＜0.01）。用放线菌酮（10mg/ml）或抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC，0.1mmol／L）或氮乙酰基半胱氨酸（N-acetylcysteine，NAC，20mmol／L）处理内皮细胞有显著降低TNFα和LPS诱导的亚硝酸盐（NO）生成和iNOSmRNA表达（P＜0.05）。抗氧化剂PDTC和NAC对NO诱导生成的抑制作用呈现剂量-效应关系。TNFα（100μ/ml）加LPS（1μg/ml）能刺激内皮细胞中NFKB的激活和转位。当内皮细胞培养体系中加入PDTC（0.1mmol／L）或NAC（20mmol/L）1.5小时后这种激活作用被阻滞。结论（1） tNFα加LPS能够在转录或转录后水平诱导iNOS基因表达。（2） tNFα加LPS诱导的iNOS基因表达依赖于NFKB的激活。（3）抗氧化剂能够通过抑制NFKB的激活来抑制iNOS基因的诱导表达。
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