目的观察大鼠心肌、小脑和培养的主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)中三磷酸肌醇受体(IP
3R)亚型的基因表达。
方法用异硫氰酸胍-酸酚氯仿一步法抽提组织总RNA,用特异性引物进行逆转/聚合酶链式反应(RT-PCR),β-actin为内标半定量检测IP
3R亚型mRNA的表达。将Ⅱ型PCR产物重组、克隆并测序。
结果发现IP
3R三个亚型在心肌、小脑和VSMC中均有表达,小脑组织中表达水平较高。PCR扩增片段分别为:Ⅰ型IP
3R,525bp(小脑)或405bp(心肌VSMC);Ⅱ型IP
3R,405bp;Ⅲ型IP
3R,169bp。
结论序列分析发现克隆的Ⅱ型IP
3R cDNA序列与设计的目的cDNA一致,证实了本文RT-PCR的特异性和准确性,提示本文所建立的RT-PCR方法能可靠地研究动物组织中IP
3R不同亚型的基因表达。
铁道部科技基金资助项目