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大鼠组织中三磷酸肌醇受体亚型基因的表达

2022-07-29
来源:求医网
目的观察大鼠心肌、小脑和培养的主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)中三磷酸肌醇受体(IP3R)亚型的基因表达。方法用异硫氰酸胍-酸酚氯仿一步法抽提组织总RNA,用特异性引物进行逆转/聚合酶链式反应(RT-PCR),β-actin为内标半定量检测IP3R亚型mRNA的表达。将Ⅱ型PCR产物重组、克隆并测序。结果发现IP3R三个亚型在心肌、小脑和VSMC中均有表达,小脑组织中表达水平较高。PCR扩增片段分别为:Ⅰ型IP3R,525bp(小脑)或405bp(心肌VSMC);Ⅱ型IP3R,405bp;Ⅲ型IP3R,169bp。结论序列分析发现克隆的Ⅱ型IP3R cDNA序列与设计的目的cDNA一致,证实了本文RT-PCR的特异性和准确性,提示本文所建立的RT-PCR方法能可靠地研究动物组织中IP3R不同亚型的基因表达。

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