通心络胶囊主要由人参、水蛭、全蝎、赤芍等中药组成。有研究提示，通心络胶囊可减轻犬心肌缺血程度，缩小心肌梗死范围。近来研究显示，细胞凋亡为一种受基因调控的细胞死亡。在哺乳动物类细胞中凋亡抑制基因Bcl-2和凋亡刺激基因Bax与细胞凋亡发生的关系密切。通心络胶囊对缺血再灌注时细胞凋亡及凋亡相关基因蛋白表达有何影响，本研究对此作初步探讨。

一、材料与方法

1.实验动物模型、分组及标本制备：雄性Wistar大鼠(320±35) g，腹腔麻醉后开胸，以穿线结扎法结扎左冠脉1 h，再灌注6 h制备心肌缺血再灌注模型。42只大鼠于制备模型前随机分成：①对照组(n=14)，每日予生理盐水4 ml/kg灌胃；②通心络小剂量组(n=14)，剂量0.5 g*kg^-1*d^-1；③通心络大剂量组(n=14)，剂量1.0 g^。kg^-1。d^-1。药物溶于等量生理盐水中，均连续灌胃5天。观察时相结束，取出心脏于4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，于心肌梗死区中部沿左室轴线每隔1 mm横断面切取数张4 μm厚切片，HE染色，供细胞凋亡及相关基因蛋白表达的检测。

2.心肌凋亡细胞检测：每一标本取3个不同部位的切片2张，按TUNEL法标记凋亡阳性细胞。DAB显色，苏木素复染，正常细胞核呈蓝色，凋亡细胞核为深浅不一的棕褐色。

3.Bcl-2与Bax基因的蛋白表达检测：切片脱蜡入水后阻断内源性POD，修复抗原，以S-P免疫组化法检测蛋白表达，检测Bcl-2者以DAB显色，而Bax者以AEC显色。胞膜或胞浆中有棕褐色颗粒者为Bcl-2蛋白阳性细胞；若为红色颗粒者则为Bax蛋白阳性细胞。

4.计算机图像分析：切片于光镜下200倍放大，经图像分析仪随机选择10个视野，检测阳性染色平均光密度(MOD)、阳性表达面积率(阳性核总面积占视野中所有细胞核总面积百分比)与阳性细胞百分比(阳性细胞数占视野中所有细胞总数的百分比)，分别计算：①细胞凋亡指数(AI)：AI(%)=MOD×表达面积率×100；②蛋白阳性表达指数(protein expression index, PEI)：PEI(%)=MOD×阳性细胞百分比×100。

二、结果

1.心肌组织病理损伤变化：光镜下对照组HE染色见明显的心肌细胞变性、坏死，可见大片心肌梗死样改变，通心络大剂量组大片心肌坏死少见，多为小灶性心肌坏死改变。

2.心肌细胞凋亡变化：与空白对照组比较，通心络小、大剂量组AI(%)明显减少(13.5±5.1比18.7±7.4，P＜0.05；8.2±2.9比18.7±7.4，P＜0.01)。大剂量组较小剂量组AI进一步降低(P＜0.05)。

3.心肌细胞Bcl-2与Bax蛋白表达变化：对照组Bcl-2与Bax蛋白阳性表达指数均升高(6.5±2.1与19.6±7.8)；通心络小剂量组仅见Bax蛋白表达下调(14.2±5.6，P＜0.05)；大剂量组则进一步下调Bax蛋白表达(10.1±3.2，P＜0.01)，且可上调Bcl-2蛋白表达(11.9±2.5，P＜0.05)。

三、讨论

本研究显示大鼠心肌缺血再灌注后心肌细胞凋亡明显增加，心肌细胞的Bcl-2与Bax蛋白表达也增高。通心络胶囊干预可减少心肌细胞凋亡，且下调Bax蛋白表达，一定程度上调Bcl-2蛋白表达。研究认为，心肌缺血再灌注时氧自由基及细胞钙超载的作用与诱发细胞凋亡有关。通心络中有益气药物及虫类通络药物，临床研究有缓解心绞痛症状，改善缺血程度，实验研究显示有扩张冠状动脉血管，拮抗心肌缺血的功效。这可能有利于其减少缺血再灌注时心肌细胞凋亡。Bcl-2蛋白具有抑制细胞凋亡的效应，与Bax导致细胞凋亡的作用相反。本研究显示通心络干预后可下调心肌细胞Bax蛋白表达，并上调Bcl-2蛋白表达，表明其抑制心肌细胞凋亡作用可能与其参与调节凋亡相关基因的表达有一定相关。

收稿日期：1999-06-18