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血管紧张素Ⅱ诱导体外培养新生大鼠心肌细胞凋亡的研究

2022-07-29
来源:求医网
本实验研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对离体培养的心肌细胞凋亡的影响。

材料与方法:SD大鼠由成都中科院抗生素研究所提供,Ang Ⅱ与碘化丙啶(PI)为美国Sigma公司产品。取1日龄SD大鼠心室肌组织,以胰蛋白酶(0.125%)消化,进行原代培养。待原代培养的心肌细胞生长至第8天,将培养瓶随机分为两组,每组8瓶,每瓶含两只乳鼠的心肌细胞。均弃去原培养液,一组加入含Ang Ⅱ的培养基,另一组加入等量的不含Ang Ⅱ的培养基,同时置于37℃孵箱中继续培养24小时后收集细胞。将上述细胞悬液过滤,以PBS洗涤2次。加入1 ml低张PI荧光染液(含PI 50 mg/ml,枸橼酸钠0.1%,Triton X-100 0.1%,RNA酶0.01%),4℃下染色30分钟后上流式细胞仪测定,以Cell Fit软件分析低二倍体的凋亡峰。

结果:以三种浓度10-7 mol/L、10-9 mol/L、10-11 mol/L的Ang Ⅱ作用心肌细胞的预实验发现均能明显增加心肌细胞凋亡,故取中间浓度10-9 mol/L进行实验。Ang Ⅱ组凋亡率为16.29%±4.31% (n=8),未加Ang Ⅱ的对照组凋亡率为5.04%±2.72% (n=8), P<0.001,差异有显著意义。故Ang Ⅱ (10-9mol/L浓度)作用心肌细胞24小时后,明显增加其凋亡率。

讨论:在心力衰竭的情况下,循环中及心肌局部组织的Ang Ⅱ增加,对心肌细胞的生存产生影响。本实验在体外直接证实Ang Ⅱ可引起心肌细胞凋亡。凋亡的结果使作为收缩单位的心肌细胞数量减少,泵血功能随之下降。同时凋亡可能与心肌肥厚和纤维网络的改建共同参与了心室的重塑。心室发生重塑后,室壁变薄,室腔扩大,舒缩功能发生障碍,使心力衰竭加重。提示Ang Ⅱ在心力衰竭发病机制中起到了重要的作用。

收稿:1998-07-29修回:1998-10-06