关键词： 缬沙坦；高血压；血管紧张素Ⅱ

【摘要】目的以自发性高血压大鼠(SHR)为研究对象，观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体AT₁阻滞剂缬沙坦的降压作用和对血液及组织AngⅡ浓度的影响，探讨左室重塑与心肌AngⅡ水平的关系。方法将雄性15周龄SHR分两组(n=6)，缬沙坦30 mg·kg^-1.d^-1，对照组用等量蒸馏水灌胃。用高压液相放免法(HPLC-RIA)测定治疗4周前后SHR血液、肾脏、心脏和动脉壁中AngⅡ浓度。结果治疗组血压由(205.0±10.7) mm Hg下降到(150.0±6.8)mm Hg(P＜0.01)，左室重量/体重由(264.3±17.1) mg/100 g下降到(208.2±13.9) mg/100 g(P＜0.01)，左室心肌和动脉壁的AngⅡ水平相应降低(P＜0.01)，但血液和肾脏中AngⅡ水平上升(P＜0.01)。结论缬沙坦抑制左室重塑与在AT₁受体水平上阻滞AngⅡ和降低心肌组织AngⅡ含量有关。

Effects of valsartan on the angiotensin Ⅱ levels and ventricular remodeling

MIAO Liyan, JIANG Wenping. Department of Cardiology,First Affiliated Hospital, Suzhou Medical College, Suzhou 215006

【Abstract】ObjectiveTo study the relationship between left ventricular remodeling and tissue angiotensinⅡ (AngⅡ) content based on the observation of effects of the specific antagonist of AT₁ receptor valsartan on blood pressure and AngⅡ levels in blood and tissues of spontaneously hypertensive rats(SHR). MethodsValsartan (30 mg·kg^-1..d^-1) and equal volume of distilled water were adminstered to 15-week-old male SHRs of the experimental (n=6) and control groups (n=6) respevtive ly for 4 weeks by gavage. High performance liquid chromatography-based radioimmunoassays (HPLC-RIA) was used to measure AngⅡ levels in plasma, kidney, left ventricle, and artery. ResultsFour weeks′ treatment with valsartan on SHR lowered the blood pressure from 205.0±10.7 mm Hg to 150.0±6.8 mm Hg (1 mm Hg=0.133 kPa) (P＜0.01)and lowered the ratio of left ventricular weight to body weight from 264.3±17.1 mg/100 g to 208.2±13.9 mg/100g (P＜0.01). AngⅡ levels were lowered in left ventricular myocardium and arterial wall (P＜0.01) but increased in plasma and kidney (P＜0.01). ConclusionValsartan can inhibit tissue remodeling in left ventricle through AT₁ receptor and low AngⅡ levels.

【Key words】valsartanhypertensionangiotensin Ⅱ

血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体AT₁阻滞剂已列为抗高血压一线药物，但AT₁阻滞剂对组织和血液AngⅡ水平的影响，对心脏AngⅡ水平与心脏重塑之间关系研究不多。然而对此了解又是深入研究AT₁阻滞剂的基础，为此本研究选用AT₁阻滞剂——缬沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)在降压作用同时，测定血液、心脏、主动脉条和肾脏AngⅡ水平，探讨AT₁阻滞剂降压、抑制左室重塑与AngⅡ水平的关系。

材料与方法

1.实验分组：选雄性SHR 12只(购自上海高血压病所)，测体重和尾动脉血压，随机分为：缬沙坦组(A组)，每日用灌胃法灌药30 mg/kg；对照组(B组)，每日灌以等量蒸馏水(n=6)。4周后再测体重、尾动脉血压并断头处死。

2.AngⅡ提取：(1)血液^［1］：迅速将2～3 ml血液收集在4℃ 0.5 ml蛋白酶抑制液中，4℃离心，3 000 g，20分钟，上清液经已处理过的Phenylsilyl silica柱固相提取，流速小于1 ml/min，流出液弃去，用2 ml水清洗柱子后，收集1 ml甲醇过柱洗脱液，氮气吹干。(2)组织^［2］：迅速取出肾脏、心脏取左心室全部(包括室间隔)，主动脉取主动脉根部到膈肌处，各自去除周围结缔组织，称重后放入4℃组织提取液中迅速匀浆，肾脏加提取液20 ml，其余均加入提取液10 ml，匀浆在4℃离心，5 000 g，20分钟，上清液同血液过柱固相提取氮气吹干。一般肾脏从断头到匀浆小于60秒，心脏小于90秒，血管小于150秒。

3.AngⅡ提纯和测定：(1)AngⅡ提纯：采用高压液相(HPLC)分离，上述提取的干燥物用0.25 ml流动相液溶解，进入Gilson HPLC系统进行分离，乙腈和七氟丁酸(HFBA)比例为55∶45，分别由双泵泵入，流速为0.8 ml/min，柱温24～25℃，C₁₈柱：5 μm，250×4.6 mmID，进样环500 μl，检测池紫外波长215 nm，进样200 μl，收集AngⅡ峰，大约1.2 ml流出液可使AngⅡ收集完全。为避免样品与标准品间污染，每次进样后均需用洗脱液把柱及进样环冲洗干净，再用流动相平衡后进下一个样品。收集的AngⅡ流出液干燥后用放免法(RIA)测AngⅡ浓度。(2)RIA分析：按常规放免方法，放免药盒购自中国原子能研究所，计数仪为SN-682型，标准曲线由不同量AngⅡ标准品用放免药盒测定获得。(3)AngⅡ测定可靠程度：本实验测定AngⅡ在血液中回收率72%，组织中回收率为61%，回收率略低，此可能为AngⅡ分离和提纯过程中有损失，但在HPLC分离中将Ang(3-8)，AngⅢ，Ang(1-7)等代谢产物与AngⅡ进行了分离，使AngⅡ测定的特异性增高，标本测定日内和日间差异分别为6.4%，16.4%，可见测定稳定性尚好。(4)数据统计：数据以±s表示，组间差异用t检验。治疗前后血压配对t检验。

4.药品及试剂：缬沙坦为诺华公司市售产品。AngⅡ标准品，pepstatin HFBA为Sigma公司；异硫氰胍(GTC)为Serva公司；乙腈，甲醇为液相分析纯。

结果

1.缬沙坦对SHR血压的影响：对照组在15周龄间SHR血压无明显变化，治疗组经4周治疗，收缩压从(205.0±10.7) mm Hg降至(150.0±6.8)mm Hg，明显降低(P＜0.01)。

2.缬沙坦对SHR左室重量的影响：对照组左室重量(mg)与体重(100 g)比值为264.3±17.1，而治疗组为208.2±13.9，明显下降(P＜0.01)。

3.缬沙坦对血液中AngⅡ浓度的影响：对照组血液中AngⅡ浓度为(41.6±6.8) fmol/ml，而治疗组血液中AngⅡ浓度明显上升，为(83.3±18.8) fmol/ml，P＜0.01。

4.缬沙坦对SHR肾脏、血管壁、心脏AngⅡ含量影响：治疗组与对照组相比，肾脏中AngⅡ水平由(106.7±16.44)升至(150.1±13.1) fmol/g(P＜0.01)，而心脏中AngⅡ浓度由(19.3±2.5)降至(4.6±1.2) fmol/g，动脉管壁AngⅡ水平由(148.4±11.9)降至(102.2±7.9) fmol/g，明显下降(P＜0.01)。

讨论

1.缬沙坦的降压作用：缬沙坦对SHR治疗表明，它有明显的降压作用，此为AT₁受体被阻滞所致。已知AT₁受体几乎介导了AngⅡ的所有作用，包括平滑肌的收缩，醛固酮的分泌，交感活性的升高等，由此实现肾素-血管紧张素系统(RAS)的升压作用。缬沙坦在AngⅡ的受体水平上阻滞了RAS的作用，产生明显降压作用。

2.缬沙坦对AngⅡ水平的影响：本实验结果显示缬沙坦治疗后，SHR血液和肾脏的AngⅡ上升，心脏和血管壁的AngⅡ下降。这结果与洛沙坦的实验结果相似^［3，4］。AT₁受体阻滞剂在受体水平上阻滞AngⅡ的作用，为平衡AngⅡ效应的减弱，反馈性RAS活性增加，使血浆AngⅡ上升，此似合理的反应。应用缬沙坦后，肾内AngⅡ与血浆AngⅡ一致性升高，提示血浆AngⅡ的升高源于肾脏肾素活性的升高。肾脏有多种内分泌功能，也富含AT₁受体，当AT₁受体受阻，肾脏自身调节，提升RAS系统，使肾脏AngⅡ水平明显上升。但心脏和血管壁在应用缬沙坦后，AngⅡ水平明显下降，此不符合RAS反馈的规律，对此机制尚需进一步研究。也许心血管组织RAS与肾脏的RAS对AT₁阻制剂的反应不同，组织RAS主要来自局部自分泌或旁分泌产生，基本不受循环RAS影响^［5］。曾有人研究提出洛沙坦可抑制心肌组织肾素mRNA的表达，降低组织肾素活性，使局部AngⅡ水平下降^［4，6］。可见AT₁阻滞剂对心血管的作用不仅阻滞AT₁受体，而且降低心血管局部AngⅡ水平，这对高血压病的治疗和保护心脏和血管的受损起了十分重要的作用。

3.缬沙坦对左室重塑的影响：已知高血压的左室肥大不仅是压力负荷的原因，其中也有神经体液的参与，因此在一般的血管扩张剂，降压药物的作用下，即使控制血压到正常，也不能逆转左室肥大^［7］。体液因素常见为RAS。转换酶抑制剂抑制AngⅡ生成，可降压，同时抑制左室重塑。本研究证明AT₁阻滞剂缬沙坦明显抑制左室肥大，降低心肌AngⅡ水平。已有研究证明左室AngⅡ水平与左室重量呈正相关^［8，9］，AngⅡ是左室肥大的生长因子，AT₁阻制剂不仅在受体水平上阻滞AngⅡ作用，而且也降低心脏组织的AngⅡ水平，因此缬沙坦有利于抑制左室重塑。缬沙坦也能降低血管壁AngⅡ水平，推测它对血管壁重塑也有抑制作用。

综上可见，缬沙坦不仅从AT₁受体水平上阻滞AngⅡ的作用，而且降低心肌组织局部AngⅡ水平，有利于高血压的治疗。