关键词： 冠状动脉疾病；乳糜微粒；高脂血症

【摘要】目的探讨脂肪餐负荷后，血浆乳糜微粒(CM)及其残粒的含量与冠心病病变程度的关系。方法40例经冠状动脉造影证实的冠心病患者（CHD组）及32例健康人（对照组）禁食12～14小时后接受标准脂肪餐负荷试验，分别采集餐前及餐后6小时新鲜血浆进行密度梯度超速离心，分离d＜1.006 g/ml及d=1.006～1.019 g/ml脂蛋白组份，以3.5%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）及激光密度扫描法测定上述两种脂蛋白组份中apo B₄₈占总apo B的百分含量，以此间接反映乳糜微粒及其残粒的相对含量。结果餐后6小时， CHD组血浆甘油三酯浓度及增量显著大于对照组。CHD组d＜1.006 g/ml apo B₄₈的百分含量及增量均显著大于对照组（P值分别＜0.01～0.001），提示餐后6小时CM含量在CHD患者显著增多。餐后6小时，多支病变组d=1.006～1.019 g/ml apo B₄₈的百分含量及增量均显著大于单支病变组（P值分别＜0.05～0.001），提示多支病变者餐后CM残粒的含量显著增加。结论结果提示，餐后CM及其残粒含量增加与冠心病的发病及病变程度密切相关，可能是冠心病的危险因素之一，有必要进行大系列临床及流行病学研究证实。

Chylomicrons and chylomicron remnants in coronary heart disease: A case-control studyZHANG Yuanli, YOU Kai, SUN Jie, et al. Peking Union Medical College Hospital, Beijing 100730

【Abstract】ObjectiveEpidemiologic studies have largely overlooked the atherogenic role of triglyceride-rich lipoproteins circulation in the postprandial state.We conducted a case-control study to test the effect of chylomicrons and chylomicron remnants on coronary heart disease.MethodsIn 40 cases with coronary heart disease verified by coronary angiography and 32 healthy control subjects, density gradient ultracentrifugation was undergone using 3.5 ml fresh plasma before and 6 hours after a standard test meal to separate the d ＜1.006 g/ml fraction, which contained very low density lipoproteins (VLDL), chylomicrons and large chylomicron remnants, and d=1.006-1.019 g/ml fraction containing VLDL remnants (intermediate density lipoprotein, IDL) and smaller chylomicron remnants. The apo B₄₈/apo B ratio in d＜1.006 g/ml fraction, a relative content of chylomicron and that in d=1.006-1.019, a relative content of smaller chylomicron remnants were measured using the methods of 3.5% polyacrylamide gel electrophoresis and densitometry.ResultsThe apo B₄₈/apo B ratio in d＜1.006 g/ml fraction 6 hours after the meal was significantly higher in CHD cases than in controls, indicating the amount of chylomicrons in postprandial plasma was larger in CHD cases. The apo B₄₈/apo B ratio in d=1.006-1.019 g/ml fraction 6 hours after the meal was significantly higher in cases with multivessel lesions than in cases with single vessel lesion, indicating the amount of chylomicron remnants was related with the degree of coronary artery disease.ConclusionsThe above results suggest that the relative concentration of chylomicrons and chylomicron remnants is a risk fator for coronary heart disease alongside other conventional factors.

【Key words】coronary heart diseasechylomicronshyperlipidemia

血浆富含甘油三酯脂蛋白（TGRL）水平增高与动脉粥样硬化及冠心病（CHD）的关系，是目前心血管疾病基础与临床研究的焦点。一系列研究发现，餐后甘油三酯（TG）水平增高与冠心病发病密切相关，高度提示是重要危险因素之一^［1］。餐后脂血症可大致分为两个时期：早期以肠道来源的乳糜微粒（CM）增加为主，晚期则主要是肝脏合成及释放极低密度脂蛋白（VLDL）增多所致^［2］。以往认为，餐后血浆中CM存留半衰期短，清除快，且脂蛋白颗粒直径大，因此致动脉粥样硬化性弱。但缺乏严格合理的病例对照研究，且受方法学影响。本研究通过分析空腹及餐后6小时TGRL apo B₄₈的相对含量以探讨CM及CM残粒与CHD病变程度的相关性。

资料与方法

一、研究对象

1.CHD组：共40例于1995年10月 ～1996年6月在北京协和医院心内科住院经冠状动脉造影证实的患者。男36例，女4例；年龄42～70岁（平均年龄57.1岁）。单支病变19例，多支病变21例。近6个月内无心肌梗塞发作史。

2.对照组：共32例，男25例，女7例；年龄40～65岁（平均55.5岁）。为同期来院做健康体检者。无冠心病的症状、体征，无糖尿病及高血压史。次极量心电图运动负荷试验（采用改良Bruce方案）。超声心动图检查无心脏结构及功能异常。以上研究对象均符合以下条件：(1)无糖尿病及肾脏病史，甲状腺功能正常；(2)无消化吸收不良；(3)空腹血清总胆固醇（TC）水平＜7.80 mmol/L，总TG水平＜3.33 mmol/L；(4)近3个月内未用调脂药及静脉注射肝素，近1周未用β受体阻滞剂及利尿剂。

二、口服脂肪餐负荷试验

所有研究对象均进行脂肪餐负荷试验，方案参照国外标准^［3］，并结合中国人饮食习惯改良制定：热量为600 kcal/m²体表面积， 脂肪、蛋白质及碳水化合物提供的能量分别占60%、14%及26%，餐中饱和脂主要为黄油。多不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸之比为0.1。受试对象禁食12～14小时后，于试验日清晨15分钟内进食脂肪餐，分别采集餐前(0小时)及餐后6小时2个点的血标本，以EDTA抗凝（1 mg/ml），于30分钟内分离血浆，即刻进行脂蛋白分离，部分血浆置-70℃冻存，于1个月内测定血脂。在8小时脂餐试验期间，只允许适量饮白开水，慢散步。

三、血脂测定

血浆TG及TC浓度采用酶法，高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）采用磷钨酸镁沉淀法及酶法。LDL-C=TC-(TG/5+HDL-C), 式中各项指标的单位均为mg/dl，TG＜400 mg/dl时此公式适用。以上测定均使用同一台日本产AU-5031 Olympus全自动生化分析仪在本实验室最佳条件下进行，质控合格。以上血脂指标的批间变异系数分别为：TC≤2.6%，TG≤2.2%，HDL-C≤5.3%。

四、CM及其残粒相对含量的测定

1.测定原理：每个TGRL颗粒均含有一个apo B分子（apo B₁₀₀或apo B₄₈），apo B₄₈仅存在于乳糜微粒及其残粒中。两种apo B的分子量已明确，分别为550 KD与225 KD。通过十二烷基硫酸钠（SDS）变性后的聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）并用标准分子量蛋白标识，可将apo B₄₈与apo B₁₀₀分离开。然后经固定染色，激光密度计扫描，便可半定量不同脂蛋白亚组份中apo B₄₈占总apo B的百分比。d＜1.006 g/ml apo B₄₈的百分比标志着CM的相对含量；d=1.006～1.019 g/ml apo B₄₈的百分比标志着CM残粒的相对含量。

2.脂蛋白的分离：分别取餐前及餐后6小时的新鲜血浆各3.5 ml，用NaBr将血浆的水合密度调整为1.250 g/ml，将其吸入离心管的底部，然后自下而上逐层铺盖d=1.063 g/ml，d=1.019 g/ml及d=1.000 g/ml 的密度梯度液各2.8 ml，采用XL-90超速离心机，Ti90角转头（Beckman Instrument,PaloAlto,CA,USA）在4℃，7 000 r/min条件下超速离心2小时。离心完毕后，以取样器自下而上吸出脂蛋白超离液，按每管0.5 ml的量分管收集，用Abbey折射仪测定每管的折光系数，再从表中查出相应的水合密度。d＜1.006 g/ml组份含CM及极低密度脂蛋白（VLDL）；d=1.016～1.019 g/ml 含CM残粒及中间密度脂蛋白（IDL）。

3.CM及其残粒的半定量分析：取含240 ul蛋白的超离液进行Warnic丙酮：无水乙醇法脱脂，在4℃以4 000 r/min速度离心30分钟沉淀载脂蛋白，再重复脱脂2次，用无水乙醚洗涤1次，氮气吹干备用。将干燥的载脂蛋白沉淀溶解于240 ul，浓度为50 mmol/L的磷酸钠缓冲液(2％SDS，5％二巯基乙醇，10％甘油及0.02％溴酚兰，pH 7.2），96℃加热变性4分钟，取40 ul容积上样电泳。采用SDS-连续系统垂直板状凝胶（3.5％聚丙烯酰胺凝胶）进行电泳。电泳缓冲液为0.1％SDS，0.1M，pH 7.2磷酸钠缓冲液，先以20 mA电流电泳15～20分钟使样品进胶，然后增大电流至50 mA，待指示染料迁移至胶板下缘1～1.5 cm处停止电泳。电泳结束后，将凝胶浸入0.25％考马斯亮兰R-250乙酸甲醇水中固定染色过夜，再于酸甲醇脱色液中脱色数次（先50％甲醇：10％乙酸；后10％甲醇：10％乙酸），直到蛋白条带清晰，背景透明为止。经上述处理好的凝胶采用连接计算机系统的激光密度计（Pharmacia LKB Ultroscan XL Laser Densitomitor,瑞士产）在600 nm光谱进行扫描，由计算机自动积分计算apo B₄₈在apo B中的百分含量，本方法经重复性检验显示：批内及批间测量变异系数≤7％。

五、统计学处理

计量资料用非配对t检验及协方差分析，计数资料用卡方检验。计量资料表示方法<