关键词： 心肌梗塞；血小板受体；多态性；静止突变

【摘要】目的探讨血小板受体糖蛋白(GPIIIa)基因变异与心肌梗塞(MI)发病的关系。方法运用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术对40例MI患者和相应数量健康人作对照行GPIIIa基因全部外显子筛查。同时，以RFLP和ASO技术检测82例MI和68例健康人对照的GPIIIa基因PlA多态性，并与50例美国健康白种人比较。结果发现GPIIIa基因外显子5中存在核苷酸静止突变；150例中国人的GPIIIa PIA多态基因型均为PlA1/PlA1，与美国白种人比较，差异有显著性。结论表明中国人群的血小板受体GPIIIa基因与MI发病无相关性。

The relationship between platelet receptor glycoprotein IIIa gene and myocardial infarction in ChineseLU Lin, YU Jinde, LE Wei, et al. Ruijin Hospital, Shanghai Second Medical University, Shanghai 200025

【Abstract】ObjectiveTo investigate the relationship between myocardial infarction and platelet glycoprotein receptor GPIIIa gene.MethodsAll exons of the GPIIIa gene were screened by denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) in 40 MI cases and number-matched controls. Furthermore, P1A1/P1A2 polymorphism of GPIIIa gene was checked in 82 MI cases and 68 controls by RFLP and ASO, with the results being compared with 50 American Caucasian.ResultsA silent mutation existed in exon 5. The genotype of GPIIIa polymorphism was exclusively P1A1/P1A1 in Chinese, which differed significantly from that in American Caucasian.ConclusionPlatelet receptor GPIIIa gene is not related to MI morbidity in Chinese.

【Key words】myocardial infarctionplatelet receptorpolymorphismsilent mutation

不稳定性心绞痛和心肌梗塞(MI)发生的原因是冠状动脉粥样硬化斑块破裂，血小板聚集，血栓形成。研究显示，血小板受体由糖蛋白IIb(GPIIb)和IIIa(GPIIIa)组成，GPIIIa具高度多态，如PlA1/PlA2多态性，即GPIIIa基因外显子2的1565位存在T→C转换，导致亮氨酸被脯氨酸置换，并形成了一个限制性内切酶Nci I酶切位点^［1］。Weiss等^［2］认为PlA2等位基因与急性MI发病存在相关性，且在＜60岁的个体更为明显。本研究将采用DGGE技术对上海地区的MI患者和健康者的GPIIIa基因所有14个外显子进行筛查，同时以RFLP和ASO检测PlA多态性，并与美国白种人群作比较，以期全面了解中国人群的血小板受体GPIIIa基因变异与MI之间的关系。

资料与方法

1.MI组82例，年龄(62.3±11.5)岁。对照组68例，来自上海地区职工健康体检。年龄(59.8±10.7)岁。50例美国健康白种人DNA样本由美国科研合作方提供。

2.提取人基因组DNA。

3.设计引物，扩增基因组DNA GPIIIa基因所有14个外显子。

4.DGGE电泳12～16小时后染色观察，发现异常条带作进一步分析。

5.异常条带再次PCR扩增，产物纯化经ABI 377测序仪测序。

6.中国人群82例心肌梗塞、68例正常对照和50例美国健康白种人以内切酶Nci I和ASO杂交检测PlA多态性。

结果

1.检查40例MI和相应数量的健康人作对照，DGGE及测序发现，外显子5第105位存在C→T转换，为静止突变，两组频率无差异。

2.GPIIIa基因外显子2中PlA1/PlA2多态性的检测：(1)Nci I的RFLP分析显示：150例中国人(68例健康人对照和82例MI患者)均为PlA1/PlA1基因型。50例美国健康白种人中7例为PlA1/PlA2基因型，43例为PlA1/PlA1基因型，PlA2等位基因频率为7%(7/100)。(2)ASO杂交结果显示：150例中国人均为PlA1/PlA1基因型，无PlA2等位基因存在。50例美国白种人中，16例为PlA1/PlA2基因型，34例为PlA1/PlA1基因型，PlA2等位基因频率16%。

讨论

长期以来，MI与凝血、抗凝纤溶系统的关系一直受到关注。晚近，在分子水平发现血小板受体GPIIIa的PlA2等位基因与美国白种人心肌梗塞发病存在相关性。

本研究在中国人群中发现GPIIIa外显子5存在静止突变，以往文献中未见报道。150例中国人PlA基因型均为PlA1/PlA1，无PlA2等位基因。50例美国白种人经RFLP和ASO检测发现一定数量的PlA1/PlA2基因型，PlA2等位基因。该结果提示：中国人群中GPIIIa基因的PlA2等位基因不存在或频率极低。这与亚洲韩国人群相似(PlA2频率0.005)^［3］，美国白种人群PlA2频率与中国人群相比，差异有显著性。因此认为，在中国人群中PlA多态性与MI发病无相关性。

本研究系上海市科委重大项目基金，“863”高科技和美国史克药厂资助

参考文献

1Newman PJ, Derbes RS, Aster Rh, et al. The human platelet alloantigens, PlA1and PlA2, are associated with a Leucine33/Proline33 amino acid polymorphism in membrane glycoprotein IIIa, and are distinguishable by DNA typing. J Clin Invest, 1989,83: 1778-1781.

2Weiss EJ, Bray PF, Tayback M, et al. A polymorphism of a platelet glycoprotein receptor as an inherited risk factor for coronary thrombosis. N Engl J Med, 1996，334:1090-1094.

3Kim HO, Jin Y, Kickler TS, et al. Gene frequencies of the five major human platelet antigens in African American , White and Korean population. Transfusion, 1995,35:863-867.

(收稿：1998-02-13修回：1998-08-27)