关键词： 白细胞介素6；单克隆抗体；心肌梗塞；再灌注损伤

【摘要】目的探讨急性心肌梗塞(AMI)心肌缺血再灌注过程中血浆白细胞介素6(IL-6)的动态变化及其意义和其单克隆抗体的保护作用。方法(1)用ELISA方法和FACSORT流式细胞仪测定28例经链激酶(SK)或重组组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)溶栓治疗的AMI患者入院即刻，再灌注1、4.5、10、20小时血浆IL-6水平和中性粒细胞表面粘附分子(CD11b)蛋白表达。(2)在兔的缺血再灌注模型上检测IL-6和CD11b，以及缺血心肌组织白细胞聚积和髓过氧化酶(MPO)活性。结果(1)28例AMI患者中，13例溶栓治疗后血管再通(A组)，15例未通(B组)。两组溶栓治疗前IL-6和CD11b表达差异无显著性，但明显高于正常对照组(P＜0.01)，A组在血管再通后1小时、4.5小时显著高于B组。(2)在兔缺血再灌注模型上，血浆IL-6和CD11b的表达和AMI患者相似。在缺血心肌组织中，中性粒细胞和MPO的活性明显升高。IL-6释放与CD11b表达及MPO活性相关(r=0.924, 0.622, P＜0.01)。缺血1.5小时后再灌注4小时比单纯心肌缺血1.5小时梗塞面积扩大［(43.8±3.9) % vs (38.7±3.5) %, P＜0.05］，但比心肌缺血5.5小时梗塞面积缩小［(43.8±3.9) % vs (52.9±4.8) %, P＜0.05］。IL-6单克隆抗体明显减少CD11b表达、MPO活性及梗塞面积［(27.5±3) % vs (43.8±3.9) %, P＜0.01］。结论IL-6在心肌缺血再灌注后的炎症损伤中起关键作用，监测血浆IL-6和CD11b的动态变化将有助于临床对心肌缺血再灌注损伤的认识。IL-6单克隆抗体对心肌缺血再灌注后的炎症损伤将有潜在的临床治疗价值。

The change of plasma interleukin-6 level and cardiac protective effect of monoclonal antibody to IL-6 during myocardial infarction reperfusionDING Wenhui, WU Fuxuan, LI Dayuan, et al. Cardiovascular Department, First Hospital, Beijing Medical University, Beijing 100034

【Abstract】ObjectiveIn order to study the change and role of plasma interleukin-6 (IL-6) and the effect of its monoclonal antibody (McAb-IL6) during myocardial infarction reperfusion in acute myocardial infarction (AMI).Methods(1) In 28 patients with AMI who received SK or rt-PA thrombolysis plasma IL-6 by ELISA and CD11b expression of neutrophil by flowcytometry were measured at admission and 1,4.5, 10, 20 hours after therapy. (2) In the rabbit model with ischemia reperfusion, similar measurements were performed as well as the accumulation of neutrophils and myeloperoxidase (MPO) activity in ischemic cardiac tissue.Results(1) Among 28 patients, 13 of them developed reperfusion (Group A) and 15 did not (Group B). Plasma IL-6 level and CD11b expression at admission were not different between Group A and Group B, but markedly higher than those of the normal controls (P＜0.01), and lasted to 24 hours after AMI. Plasma IL-6 level and CD11b expression were significantly higher in Group A than in Group B at 1 and 4.5 hours after reperfusion (P＜0.01, P＜0.01). (2) In the rabbit model, the changes of plasma IL-6 level and CD11b expression were similar to those of AMI patients. In addition, accumulation of neutrophils and MPO activity significantly increased in ischemic cardiac tissue. IL-6 release was correlated with CD11b expression and MPO activity (r=0.924 and 0.622, respectively, P＜0.01). Reperfusion (4 hrs) following ischemia (1.5 hrs) significantly increased size of myocardial infarct compared with ischemia (1.5hrs) alone ［(43.8±3.9) % vs (38.7±3.5) %, P＜0.05］, whereas it markedly reduced infarct size compared with ischemia (5.5 hrs) ［(43.8±3.9) % vs (52.9±4.8) %, P＜0.05］. McAb-IL6 treated rabbits showed less CD11b expression, MPO activity and infarction size ［(27.5±3) % vs (43.8±3.9) %, P＜0.01］.ConclusionIL-6 plays a critical role in myocardial ischemia postreperfusion inflammatory injury. Monitoring the changes of plasma IL-6 and CD11b would help to recognize myocardial ischemia reperfusion injury. McAb IL-6 might be useful clinically at reducing myocardial ischemia postreperfusion inflammatory injury.

【Key words】interleukin-6monoclonal antibodymyocardial infarctionreperfusion injury

心肌缺血最根本的治疗措施是恢复血供，但重建血供本身将在一定程度上引起组织的进一步损伤^［1］。心肌缺血再灌注的部分损伤被认为与中性粒细胞和血管内皮细胞及心肌细胞的相互作用有关。同时，细胞因子起着调节和修饰作用^［2］。有研究表明，中性粒细胞的消耗可减少心肌缺血再灌注损伤。实验动物的心肌缺血再灌注区有白细胞介素6(IL-6) mRNA的表达，其表达高峰在再灌注3小时^［3］。

本研究观察了急性心肌梗塞(AMI)患者和兔的AMI模型在心肌缺血再灌注期间IL-6的动态演变及其单克隆抗体(McAb-IL6)对心肌缺血再灌注损伤的效应。

资料与方法

一、临床资料

1.AMI组：符合WHO诊断标准的我院CCU住院患者28例，于发病平均(6±4.5)小时接受了链激酶(SK)或重组组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)静脉溶栓治疗。28例中3例溶栓后90分钟行冠状动脉造影，余25例以临床指标判定血管再通^［4］。(1)相关血管再通组13例，平均年龄60.8岁。(2)相关血管未通组15例，平均年龄66.7岁。

2.标本采集：血管再通组于溶栓前及血管再通后1、4.5、10、20小时取血标本；血管未通组在溶栓前及后3、6.5、12、24小时取血标本，电镜下观察中性粒细胞形态，测定CD11b和IL-6，方法同动物实验部分。

二、动物实验

1.心肌梗塞再灌注模型：选2.0～2.5 kg日本雄性大耳白兔，随机分为5组，每组8只：(1)心肌梗塞(MI) 1.5小时组；(2)MI 5.5小时组：结扎冠状动脉的左回旋支(LCX) 1.5小时或5.5小时复制心肌梗塞模型；(3)MI 1.5h/R4h组：结扎LCX1.5小时后松解4小时为缺血再灌注模型；(4) MI 1.5h/R4h+IL-6 McAb组：于再灌注前10分钟先静脉给予IL-6 McAb 1 mg/kg；(5)假手术组：在LCX下穿线，不结扎。

2.标本采集与检测方法：(1)于实验终点，经静脉插管取血0.5 ml，肝素抗凝，用FAcsort流式细胞仪测定CD11b；3 ml抗凝血即刻离心(3 000 rpm ×5分钟)，弃上清液，用2.5%戊二醛缓冲液(pH 7.4)固定，于CX-Ⅱ型透射电镜下观察中性粒细胞形态；3 ml血加入10% EDTA及抑肽酶，低温4℃下离心，分离血浆，用ELISA方法测定IL-6(试剂盒购自第四军医大学免疫教研室)。(2)取血后重新结扎LCX，经颈静脉注入2%伊文蓝8～10 ml，5分钟后静脉注射15%氯化钾处死动物，摘取心脏，用盐水中冲净残血，切下左心室，并用0.1%四唑氮蓝(TTC)染色以区分缺血区和坏死区。用比色法测定缺血区的髓过氧化酶(MPO)活性，荧光法测定丙二醛(MDA)含量。部分标本用10%福马林固定，石蜡包埋，HE染色，光镜下观察中性粒细胞的浸润。

3.统计方法：实验结果以均值±标准差表示。用多组间方差分析q检验作统计学处理。

结果

28例AMI患者溶栓后血管再通者13例，未通者15例。溶栓前距发病时间(6±4.5)小时其血浆IL-6［(17.3±3.0) μg/L vs (16.8±2.6) μg/L］和中性粒细胞表面CD11b［(68.9±7.0) Meanf.l vs (73.2±7.0) Meanf.l］两组间差异无显著性，但分别高于正常对照组［15例IL-6(6.4±3.2) μg/L；CD11b (21.8±4.9) Meanf.l］(P＜0.01)，且持续至心肌梗塞后24小时；溶栓治疗血管再通后1小时、4.5小时显著高于未通组相应时间点(图1，2)。两组年龄、性别、梗塞部位、心功能差异均无显著性。

注：*与未通组同时间点相比，图2同

图1急性心肌梗塞溶栓治疗后血管再通组与未通组IL-6的变化

图2急性心肌梗塞溶栓治疗后血管再通组与未通组中性粒细胞表面CD11b表达的变化

兔MI 1.5小时和5.5小时组的IL-6和CD11b明显高于正常对照组(P＜0.05, P＜0.01)；缺血区心肌组织MPO活性和MDA含量明显高于正常对照(P＜0.05, P＜0.01)。 MI 1.5/R4h组IL-6、CD11b、MPO、MDA均显著高于单纯缺血1.5小时组(表1)；IL-6、CD11b与心肌MPO活性呈正相关(r=0.924, 0.622, P＜0.01)。MI 1.5h/R4h+IL-6 McAb组CD11b表达、心肌MPO活性、MDA含量明显降低，心肌梗塞面积缩小(27.5±0.3)%(P＜0.05)(表1)。光镜下见中性粒细胞在心肌缺血区浸润；电镜下见AMI患者和兔心肌缺血时周围血中性粒细胞激活，呈现伪足形成、脱颗粒<