反复缺血可引起缺血区内微血管芽胞生长形成新的侧枝循环，最近已有研究表明这些侧枝微血管生成是由成纤维细胞生长因子(FGF)所中介的，我们利用从牛心肌中纯化的酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)，观察它对培养的心肌微血管内皮细胞和兔髂动脉侧枝循环建立的影响。

一、材料和方法

1.材料：心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells, CMEC)取自健康Sprague-Dauley大鼠，动物实验选用新西兰种系家兔。

2.方法：(1)aFGF对CMEC生长的影响：按Masahi^［2］方法取原代CMEC，免疫荧光法鉴定VIII因子相关抗原，传三代后测定不同浓度的aFGF对CMEC³H-TdR掺入率的影响。(2)aFGF对髂动脉缺血区微血管形成的影响：取新西兰种系家兔8只，20%乌拉坦2.5ml/kg静脉麻醉，经左颈总动脉插管行髂动脉造影。双重结扎双侧股动脉起始部，在结扎处上方1.0～1.5cm处分别向髂内动脉及分支注入含有不同组份的Affi gel blue bead，逐层缝合。术后第10天行髂动脉造影。处死动物，在股动脉内侧3cm结扎部下端4～5cm处取0.3cm×1.5cm×2.0cm的肌组织块，微波—生理盐水固定，血管平滑肌肌动蛋白标记，ABC法免疫组化染色及血管计数(每份片取5个视野，分别计数后取均数)。统计学处理：采用t检验。

二、结果：

1.aFGF对CMEC³H-TdR掺入率影响：当在含0.4%小牛血清的培养液中存有微量的aFGF(10～20ng/ml)时CMEC的³H-TdR掺入率即有增加，表明细胞核内DNA合成增加，aFGF有促CMEC增殖作用，作用呈剂量依赖性，当aFGF浓度达500ng时其促CMEC增殖作用达最大。

2.aFGF对兔髂动脉缺血区微血管形成的影响：(1)髂动脉造影所见：正常髂动脉造影可见股动脉走行清晰，髂内动脉分支稀疏。双侧股动脉结扎后，结扎处远端血管未显影，给与aFGF后第10天血管造影显示aFGF组微细血管分支均较盐水对照组明显增加，所有aFGF组的结扎处远端股动脉均已显影，表明有侧枝血管形成和血流通过；盐水组的8只兔血管结扎处远端均未见上述变化。(2)组织学检查所见：盐水组免疫组化染色见肌组织间隙中有少量稀疏的微血管，血管染色呈黄褐色，微血管数13.6±1.2个/视野。aFGF组见有较多的均匀分布的微血管，微血管数24.2±2.5个/视野。两组比较差异显著(P＜0.05)。

三、讨论

酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)是心肌组织中含量最高的细胞生长调节因子，对其是否能促进侧枝循环建立尚存有争议。本研究在体外观察了aFGF对CMEC生长的影响，证实aFGF确有促进CMEC增殖的作用。在体内利用兔下肢缺血模型，将含aFGF的生物相溶性载体Affi gel blue beads(直径40～60μm)沿髂动脉顺行植入，使其滞留在微血管内(也同时引起或加重了组织缺血)，利用该beads能缓慢持续释放其内含药物的特点，达到24小时内经动脉连续给药的目的。结果显示：髂动脉造影可见aFGF组微血管分支较盐水组明显增多，结扎处下段股动脉亦在中断后又有显影，提示有侧枝循环血流通过。组织学免疫组化染色显示：aFGF组有较多的均匀分布的微血管形成(24.2±2.5个/视野)与盐水组(13.6±1.2个/视野)比较差异显著。研究表明FGF样物质可直接参与微血管形成，它对血管内皮细胞有较强的趋化作用和促增殖作用，并刺激血管内皮细胞产生胶原酶和纤维蛋白溶解酶原激活物(t-PA)进一步降解基底膜，同时诱导毛细血管内皮细胞形成管腔样结构。FGF发挥促微血管生成作用尚需有组织缺氧的因素存在。Unger等研究显示，当心肌缺氧时血管内皮细胞膜上的FGF受体上调，使FGF的促血管增殖作用明显增强，而FGF对非缺氧的心肌组织则无促血管生成作用。本研究发现新生的血管壁中有完整的平滑肌细胞结构，平滑肌肌动蛋白标记后染色也呈阳性，这提示aFGF可能引起了较大的血管形成，对平滑肌细胞的参与仍存有较大的争议。作者认为平滑肌细胞的参与有助于建立有完整功能的侧枝循环，应加强对血管形成中平滑肌细胞作用的研究。

(收稿：1996-11-11修回：1997-11-03)