近年研究发现扩张型心肌病(DCM)患者心肌中存在线粒体DNA(mtDNA)的突变，可能与DCM的发生有关。本研究对扩张型心肌病心肌mtDNA进行分析，试图说明DCM可能存在的分子机制。

资料与方法(1)研究对象：经病理检查证实为DCM的活检组织4例，石蜡包埋DCM心肌组织6例，DCM患者血样13例(包括取材心肌组织的10例)，以及作为对照的心肌组织切片8例(3例肥厚型心肌病经活检证实，5例心肌梗塞经心电图及酶学证实)，及血样标本4例取材于上述心肌梗塞患者。(2)实验方法：提取心肌组织、组织切片、血样中mtDNA，PCR扩增，引物L8531与H381相距8.4kb，配对检测mtDNA片段缺失；H9312与L8531相距780kb，用于扩增未发生缺失的mtDNA；L8531与H601相距8.6kb，测定PCR产物正确性。构建以PGEM-3Ef(+)为载体含待测基因的质粒DNA，BamHI、PstI双酶切鉴定克隆，提取、纯化、扩增，以ABD373A型自动序列分析系统进行测序分析，由T₇及Spb双向测序识别序列L8531-H9312，结果与正常人mtDNA L8531～H9312序列比较。

结果(1)PCR扩增结果：以相距8.4kb的引物L8531、H381配对，10例DCM心肌组织mtDNA中检测出4例7.4kb缺失，对照组8例心肌组织中检测出3例，实验组及对照组血样mtDNA均未检出缺失。以相距780bp的L8531与H9312配对扩增，所有心肌组织及血样均扩增出780bp的mtDNA片段。(2)PCR产物正确性测定：以L8531/H381为引物扩增出1.0kb片段，用L8531与H601配对，同样条件下对同一样本同时扩增，结果同时出现1.2kb、1.0kb两片段，证明1.0kb片段非引物退火错误所产生。(3)测序结果：mtDNA自动测序结果与正常人mtDNA8531-9312 780bp片段对比：1例DCM患者心肌mtDNA在8794位点发生错义突变，CAC(组氨酸)→TAC(酪氨酸)，又在8907位点发生同义突变CAC→CAT；另1例DCM患者心肌mtDNA分别于8584、8701、8707位点发生突变，使GCC(丙氨酸)→ACC(苏氨酸)、ACC(苏氨酸)→GCC(丙氨酸)、CAC(组氨酸)→CAA(谷氨酰胺)。对照组与DCM患者血中mtDNA均未发现点突变。

讨论本研究结果表明，DCM患者心肌组织中存在mtDNA 7.4kb缺失，缺失部位在ATP酶6基因和D袢区域之间，这种缺失亦存在于肥厚型心肌病、心肌梗塞的心肌组织，且从每例DCM患者(包括发生mtDNA缺失标本)均扩增出正常mtDNA片段，说明mtDNA突变的非特异性和异质性。mtDNA没有保护系统，受氧自由基损伤程度是核DNA的16倍以上，因而易发生缺失，并非DCM所特有。有报道随年龄增加，mtDNA缺失比例增加，提示老化过程损伤mtDNA。

本组2例DCM心肌mtDNA点突变均存在于8531～9206部位，即编码ATPaseb区，而在9210～9331 CoⅢ编码区未发生点突变。8531～9312均位于氧化磷酸化复合物V编码区，错义突变会改变氨基酸合成，影响氧化磷酸化过程中酶的活性，造成ATP合成受抑。DCM患者mtDNA片段缺失能否与点突变共同作用影响ATP的合成?部分DCM未发现有mtDNA缺失，能否以点突变为主?尚需深入研究。

本项目受国家自然科学基金资助

(收稿：1996-09-05修回：1997-04-25)