不应期(refractory periods)是反映心脏各部位组织的兴奋性和传导性的客观指标，包括心房肌、房室结、希氏-浦肯野系统和心室肌的不应期。根据对期前刺激的反应方式，不应期可分为以下3种：

(1)相对不应期(relative refractory periods, RRP)：是指在期前刺激(S₂)的过程中，引起较基础刺激(S₁)传导时间延长的最长期前刺激的配对间期(S₁S₂)。以房室结为例，导致A₂H₂间期延长(＞A₁H₁间期)的最长A₁A₂间期就是房室结的相对不应期。细胞电生理学中，RRP表示心肌细胞已完成了前次除极之后的大部分复极过程，却尚未完全恢复到静息膜电位的水平，此时对较强的刺激，心肌细胞虽然能够被再次除极，并能产生可传布的冲动，但动作电位的振幅较低，除极速度和传导速度均减慢。因此，相对不应期标志着相应心脏组织的应激性(兴奋性)和传导性未完全恢复正常。

(2)有效不应期(effective refractory period,ERP)：是指不能传播通过心脏某个特定组织的最长期前刺激的配对间期(S₁S₂)，此时期前刺激的冲动不能下传。对于心脏传导系统各部位的有效不应期，应在各部位的近端处(冲动传入端)进行测定。以房室结为例，其有效不应期是不能传导到希氏束(无H₂)的最长期前心房刺激(A₁A₂间期)。细胞电生理学的ERP是表示在绝对不应期之后，心肌细胞的兴奋性刚开始恢复，但不具有传导性。此时，强刺激仅引起局部膜电位的不完全性除极，不产生可传布的冲动。对此，体表心电图和置于心腔内的电极导管不能记录到心电信号。

(3)功能不应期(functional refractory period,FRP)是指能够通过心脏某个特定组织下传的最短的连续两个刺激冲动间期，代表该心脏组织的传出功能，应在组织的远端(冲动传出端)进行测定。因此，要测定一个心脏组织的有效不应期，就必须具备这样一个前提，即按冲动的传导方向，近段心肌组织的功能不应期应短于该组织(远段组织)的有效不应期。仍以房室结为例，其功能不应期是由A₁A₂下传的最短H₁H₂间期。如果房室结的功能不应期长于其远端的希氏-浦肯野系统的有效不应期，就无法进行测定。

测定不应期的方法是采用程序期前刺激技术。通过8～10个周长恒定的基础刺激(S₁)，使心脏组织的不应期达到并保持稳定；在最末一个S₁刺激之后，加入一个期前刺激(S₂)。由于心脏传导系统具有双向(前向和逆向)传导功能，也同样存在着前向和逆向不应期。对传导系统各部位前向不应期和逆向不应期的测定，是分别采用期前心房刺激和心室刺激的方法。从舒张晚期开始加发一个期前心房或心室刺激，以5 ms或10 ms的步长逐渐缩短S₁S₂间期，观察期前刺激的前传或逆传反应，直到心房或心室的有效不应期。

不应期的测定应注意3点：①刺激电流强度对不应期的影响。心房和心室的有效不应期均与所采用的刺激电流大小成反比。当刺激电流增至10 mA时，心室的有效不应期将缩短近30 ms。此外，高刺激电流还增加非临床性心律失常的诱发率。为了排除刺激电流对不应期的影响和准确观察干预前后的不应期变化，大多数心电生理研究室采用两倍舒张期的电流作为标准刺激电流。②基础刺激周长(S₁S₁间期)对不应期的影响。用不同的基础刺激周长所测定的不应期必将不同。正常情况下，心房、希氏-浦肯野系统和心室的有效不应期是与基础刺激周长直接相关的，即随着基础刺激周长的减少而缩短。相反，当基础刺激周长逐渐减少时，房室结的有效不应期是增加的，而其功能不应期则是趋于缩短。③测定部位对不应期的影响。为了准确测定不应期，所记录部位的选择是十分重要的。心房和心室的不应期应在刺激的部位测定；而房室结和希氏-浦肯野系统的不应期则应在希氏束电图上测定。