输血传播病毒(TTV)是继庚型肝炎病毒（HGV）后新发现的一种可经血源传播的病毒，系日本学者新近在1名输血后转氨酶升高患者体内发现的新型DNA病毒^［1］。国际上尚未正式对该病毒命名，目前以发现该病毒第1例患者的名字（TT）命名，巧合的是经输血传播病毒的缩写也是TTV(transfusion transmitted virus)。由于该病毒可引起输血后肝炎，且国外也陆续报道在血库血液中也有较高的阳性率^［2］，因此，血源的污染有可能是该病毒传播的主要途径之一。我国血库血液中是否存在该病毒的污染、其基因序列如何尚不完全清楚。我们对112例血库血液进行了TTV检测，并对其中部分阳性样本进行了DNA序列分析。

材料和方法

1检测样本112例血液来自某地中心血站。

2DNA抽提从血库血液中分离血浆，取血浆200 μl，采用Qiagen Blood Kit（Cat.No.29104），按试剂盒说明书进行。

3半巢式PCR第一轮引物序列为5′-ACAGACAGAGGAGAAGGCAACATG-3′（正链）；5′-CTGGCATTTT-ACCATTTCCAAAGTT-3′（负链）。扩增条件94 ℃30秒，58 ℃30秒，72 ℃45秒，共35个循环。第二轮：引物 5′-GGCAACATGTTATGGATAGACTGG-3′（正链）；5′-CTGGCATTTTACCATTTCCAAAGTT-3′（负链），扩增94 ℃ 30秒，58 ℃ 30秒，72 ℃ 30秒，共25个循环，最后72 ℃延伸7分钟。

4琼脂糖凝胶电泳扩增的第二轮产物经20 g/L琼脂糖凝胶电泳观察结果。

5DNA序列测定取3例PCR扩增阳性产物经ABI 337自动测序仪（PE公司）直接测序，测序引物为5′-GGCAACATGTTATGGATAGACTGG-3′。

结果

1PCR检测结果112例全血中，经PCR扩增为阳性者共12例，阳性率为10.7%。

2DNA序列分析3例PCR产物直接测序结果见图1，与日本学者报道的序列相比，我国血库中发现的一号样品(CB1)TTV的核苷酸序列同源性为96.0%；二号样品(CB2)核苷酸序列同源性为95.3%；与日本在输血后肝炎中发现的TTV基本属同一类型。三号样品(CB3)核苷酸序列同源性仅为63.9%，说明我国可能存在TTV其他类型。

图1中国血库TTV部分DNA序列与日本序列比较

3氨基酸序列分析由DNA序列推导出的氨基酸序列见图2，与日本报道相比，我国在原发性肝癌中发现的一号样品TTV的氨基酸序列同源性为96.0%，二号样品氨基酸序列同源性为95.2%，三号样品的氨基酸序列同源性为64.9%。

2中国血库TTV部分氨基酸序列与日本序列比较

讨论

TTV是一单链DNA病毒，无包膜，具有微小DNA病毒的某些特性。对DNaes I 敏感，抗RNase A，在氯化铯中的密度高于HBV，其基因组全长3 739 bp。TTV有两个ORF^［3］，ORF1位于589-2 898核苷酸，编码770个氨基酸，ORF2位于107-712核苷酸，编码202个氨基酸。

国外学者报道供血员中的阳性率差异较大，从1.9%～12%不等^［2，3］，我们在某地中心血站献血者中的检出率为10.7%，反映我国血源中污染TTV的情况较为严重，经血源传播可能是TTV扩散的主要原因之一。此外，我们在100例原发性肝癌患者中发现有20% 的阳性率，反映该病毒在原发性肝癌患者中感染率较高，但其是否可以导致肝癌尚有待于进一步研究。国外在其他疾病中也发现有较高的阳性率，如非甲-庚慢性肝炎患者中的检出率为46%，肝硬化患者为48%，血友病患者为68%，静脉注射毒品成瘾者为40%，血液透析患者为46%^［3］。

由于目前国内外对TTV的研究还刚刚起步，有关该病毒的致病性还不甚清楚，是否可以单独致病或同其他病毒协同致病有待于进一步研究。如果证明TTV确实可以致病将对于了解病毒性肝炎和原发性肝癌的病因学、发病机制、临床防治等具有一定的理论和应用价值。

志谢：感谢美国华盛顿乔治顿大学医学中心张鲁榕博士协助合成TTV引物

参考文献

1Nishizawa T, Okamoto H, Konishi K, et al. A novel DNA virus (TTV) associated with elevated transaminase levels in posttransfusion hepatitis of unknown etiology. Biochem Biophys Res Commun, 1997,241:92-97.

2Simmonds P, Davidson F, Lycettet C, et al. Detection of a novel DNA virus (TTV) in blood donors and blood products. Lancet， 1998, 352:191-195.

3Okamoto H, Hishizawa T, Kato N, et al. Molecular cloning and characterization of a novel DNA virus (TTV) associated posttransfusion hepatitis of unknown etiology. Hepatology Res, 1998,10:1-16.

收稿：1999-03-12修回：1999-07-18