免疫功能紊乱在再生障碍性贫血（再障）病理过程的发生和发展中起着十分重要的作用。我们通过研究再障患者不同状态和不同分化阶段的T淋巴细胞亚群变化和其对造血的抑制作用，寻找诊断免疫型再障的较准确的方法，为临床治疗提供依据。

病例和方法

1病例

再障22例，其中重型再障(SAA)Ⅰ型5例，Ⅱ型6例，慢性再障(CAA)11例；男19例,女3例;平均年龄31.3岁（20～50岁）。除1例CAA外均接受过治疗。14名献血员为正常对照组。

2单个核细胞激活

10⁶/ml外周血单个核细胞在体积分数为10%的牛血清，5×10^-5mol/L 2-巯基乙醇，2mmol/L L-谷氨酰胺，4μg/ml PHA-P（购自Sigma公司）, IMEM培养液条件下，置体积分数为5%的CO₂，37℃及饱和湿度下培养96小时。

3T淋巴细胞集落（CFU-T）培养

方法见文献［1］，其中牛血清浓度为体积分数15%，PHA-P 4μg/ml。≥50个细胞组成的细胞团为1个集落。

4活化的外周血单个核细胞抑制骨髓粒-巨噬细胞集落(CFU-GM)形成

培养体系中含甲基纤维素9g/L，牛血清、AB血清、胎肌浸液体积分数分别为20%、10%、20%，2mmol/L L-谷氨酰胺，10⁵骨髓单个核细胞，3×10⁵再障或正常人活化的外周血单个核细胞。接种于24孔培养板（购自Costar公司），每孔0.5ml，置体积分数为5%的CO₂，37℃及饱和湿度下培养14天。≥40个细胞组成的细胞团为1个集落。

5间接免疫荧光测定

方法见文献［2］，其中CFU-T观察整个集落阳性率。

6统计方法

采用秩和检验，t检验。

结果

1外周血T淋巴细胞亚群变化

11例SAA和11例CAA及14名正常对照CD₄⁺细胞百分率分别为(28.9±13.1)%，(29.1±9.4)%和(29.5±6.7)%，三组比较,差异无显著性。CD₈⁺ 细胞CAA为(37.8±8.9)%，SAA为(24.2±11.0)%，正常对照为(21.5±8.7)%，CAA组与SAA和正常对照比,差异有显著性(P＜0.01),SAA组与正常对照比,差异无显著性。CD₄⁺/CD₈⁺比值SAA和CAA分别为1.2±0.3和1.0±0.4,正常对照为1.5±0.5,SAA与正常对照比,差异无显著性，CAA与正常对照比,差异有显著意义(P＜0.01)。其中CD₄⁺/CD₈⁺＜1在SAA和CAA，分别占27.3%和63.6%，在正常对照组仅1例（7.0%）。

2活化后的外周血T淋巴细胞亚群变化

8例SAA和10例CAA T淋巴细胞激活后CD₄⁺细胞分别占(35.8±15.9)%和(29.2±11.3)%，正常对照组为(36.8±8.4)%,三组比较,差异无显著性。SAA和CAA CD₈⁺细胞分别占(35.6±8.6)%和(41.4±8.4)%，正常对照组为(27.2±8.4)%,SAA、CAA与正常对照比,CD₈⁺细胞显著增加(P值分别为＜0.02和0.01)。CD₄⁺/CD₈⁺SAA和CAA分别为1.2±0.8和0.7±0.3,正常对照为1.4±0.3,SAA和CAA与正常对照比,P值分别＜0.05和0.01。62.5%的SAA和80.0%的CAA CD₄⁺/CD₈⁺＜1，正常对照组无倒置者。

3CFU-T亚群变化

8例SAA和10例CAA其CD₄⁺/CD₈⁺为1.1±1.1和1.5±2.9，正常对照组为1.5±0.5。SAA,CAA与正常对照比,P值分别＜0.05和0.02。62.5%的SAA和80.0%的CAA CD₄⁺/CD₈⁺＜1。正常对照组仅有1例CD₄⁺/CD₈⁺倒置。

4CFU-T形成能力

11例SAA和11例CAA CFU-T数为（46.0±25.8)/5×10⁴单个核细胞和(40.6±18.2)/5×10⁴单个核细胞，正常对照组为(67.1±16.6)/5×10⁴单个核细胞。SAA,CAA与正常对照组比,P值分别＞0.05和＜0.01。

5激活后的T淋巴细胞对CFU-GM生长的影响

研究的4例CD₄⁺/CD₈⁺＜1的CAA活化的T细胞抑制正常骨髓CFU-GM生长，抑制率达(92.1±5.5)%。3名正常对照活化的T细胞对CFU-GM抑制率为(30.2±29.8)%，两者比较,差异有显著性(P＜0.01)。

讨论

18.2%的SAA和18.2%的CAA患者外周血CD₄⁺细胞绝对减少，18.2%的CAA患者外周血CD₈⁺细胞绝对增加，27.3%的SAA和63.6%的CAA患者CD₄⁺/CD₈⁺＜1,且CAA患者CD₈⁺细胞增加及CD₄⁺/CD₈⁺比值显著减少。再障患者T细胞活化后CD₄⁺细胞增殖弱于正常对照组，而CD₈⁺细胞增殖显著高于正常对照组，揭示部分再障患者T_S前体细胞处于超敏状态,因此激活后T细胞亚群的变化更能反映出再障患者免疫功能的异常。再障患者CD₄⁺或CD₈⁺CFU-T亚群与激活的T细胞亚群行为相同。提示免疫型再障在T淋巴细胞分化阶段就出现异常，优势促进CD₈⁺细胞的分化和增殖，并抑制CD₄⁺细胞的分化和增殖。因而T_S细胞直接和间接抑制造血。

45.4%的SAA和63.6%的CAA CFU-T数低于正常对照组下限，其中2例SAA和5例CAA CD₄⁺/CD₈⁺＜1，属免疫型再障，尤其是CAA，T_S细胞抑制了CFU-T增殖和分化。另外4例SAA，2例CAA，其中包括2例无CFU-T的患者CD₄⁺/CD₈⁺＞1，属造血细胞异常型再障。

正常人激活T细胞对骨髓CFU-GM生长的抑制率为21%～59%^［3］。本组3名正常人激活T细胞对骨髓CFU-GM生长的抑制率为(30.2±29.8)%，4例CD₄⁺/CD₈⁺＜1的CAA激活T细胞对骨髓CFU-GM生长的抑制率高达(92.1±5.5)%，证明CD₄⁺/CD₈⁺＜1的再障患者其T_S细胞抑制髓系祖细胞增殖和分化。

本研究结果提示,再障患者外周血T细胞激活后测定CD₄⁺和CD₈⁺亚群可提高免疫型再障的诊断率，并为其治疗和预后判断提供依据。

参考文献

1戴育成，胡国柱，文珠，等.人类T淋巴细胞集落形成的研究Ⅰ.微量甲基纤维素半固体培养方法及细胞间相互作用对T细胞集落形成的影响.中华血液学杂志,1985,7:385-388.

2王志澄，陈璋，曹义海，等.应用单克隆抗体对慢性淋巴细胞白血病免疫分型的研究.中华血液学杂志,1985,6:338-341.

3Nakao S,Harada M,Kondo K,et al.Effect of activated lymphocytes on the regulation of hematopoiesis suppression of in vitro granulopoiesis by OKT₈⁺,Ia⁺ T cells induced by alloantigen stimulation.J Immunol,1984,132:160-164.

收稿:1998-10-05

修回:1999-02-02