关键词： 葡糖磷酸脱氢酶；溶血；基因；点突变；种族关系

摘要目的鉴定中国白族和傣族人群中的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)G487A基因突变型,为少数民族G6PD缺乏症的防治提供理论指导;为研究分子进化、民族起源及迁移提供遗传学资料。方法对云南白族、傣族、汉族及广西汉族的G6PD缺乏症患者进行聚合酶链反应-限制性内切酶分析(PCR-RE),聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)及DNA序列分析。结果首次在白族及傣族人群中发现G6PD g487A基因突变型。66例白族患者中发现6例,52例傣族患者中发现1例G487A突变;检查46例广西汉族患者未发现该突变。G6PD g487A基因突变型的个体在无诱因作用时,其血红蛋白含量、红细胞计数及网织红细胞计数基本正常。结论G6PD g487A基因突变型多属G6PD缺乏症临床Ⅲ型;该突变型是汉族、白族和傣族共同具有的基因突变型。提示:中华民族可能同源。

Study on G487A mutation of the glucose-6-phosphate dehydrogenase gene

JIANG weiying,DU Chuanshu,CHEN Luming,et al.

department of Medical Genetics,SUN Yat-sen University of Medical sciences,Guangzhou510089

AbstractObjectiveIn order to reveal the molecular evolution and ethnic origin and immigration,on the basis of G6PD G487A mutation,and estimate the incidence of the mutation in Bai, Dai, and Han people in Yunnan and Guangxi.MethodG6PD deficient individuals were studied by using PCR-RE,PCR-SSCP and DNA sequencing.ResultsThe g487A mutation in Bai and Dai people was identified for the first time and its relative incidences were 6/66 and 1/52,respectively.The individuals of G6PD g487A mutation showed the features of G6PD clinic type Ⅲ.No G487A was found in han people in Guangxi(0/46).ConclusionThe G6PD G487A mutation revealed in some ethnic groups of China implies that different national minorities of Chinese may be origined from a common ancestor.

Key wordsGlucose phosphate dehydrogenaseHemolysisGenePoint mutationEthnic relationship

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(Glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD,EC1.1.1.49)基因突变、酶活性异常改变与多种疾病有关。其中红细胞G6PD缺乏症是危害较大、累及全球4亿人的遗传性溶血性疾病^［1,2］。G6PD基因全长20114bp,由13个外显子和12个内含子组成。迄今已发现G6PD基因突变型122种,中国人中有15种^［3,4］,多数为单个碱基的置换所致的错义突变。G487A(Gly163 Ser)因其特殊的位置及分布的地区引起有关学者的关注。我们对云南省白族、傣族、汉族及广西汉族人群中的G6PD基因G487A突变进行了分析,报道如下。

病例和方法

1被检对象

无亲缘关系的云南省大理州白族66例,汉族11例;德宏州傣族52例;昆明市汉族13例;广西汉族46例,共188例。被检对象均为既往有“蚕豆病”或“药物性溶血”病史的患者,再经G6PD/6磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGD)比值法确定。为尽量得到较纯正的少数民族标本，取样时均在该民族聚居地，并考证其祖籍、语言、文字及婚配方式。

2一般血液学检查

包括血红蛋白含量，红细胞计数，网织红细胞计数。

3样品DNA制备

取静脉外周血，ACD抗凝，酚-氯仿法抽提DNA。

4聚合酶链反应-限制性内切酶图谱分析(PCR-RE)

用一对引物特异性扩增G6PD基因外显子6，再用Alu酶切，100g/L聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染，甘油浸泡，干胶。

上游引物：5′-GCGTCTGAATGATGCAGCTCTGAT-3′；

下游引物：5′-CTCTGCAGGTCCCTCCCGAAGGGC-3′。

5PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析

上游引物：5′-AGCGTGATCCTCACTCCCC-3′；

下游引物：5′-GGCCAGGTGAGGCTCCTGAGTA-3′。

6DNA序列分析