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材料和方法
1还原液中加入碘乙酸先配制53.78mmol/L(1%)碘乙酸液:碘乙酸20mg,蒸馏水0.8ml,以0.15mol/L Na2HPO41.2ml调pH为7.0。按7份还原液加1份碘乙酸液混合,4～8℃贮藏,可保存30天。
2每1?000ml 16.7μmol/L pH6.6磷酸盐缓冲液加Triton X-100 1ml,可使溶血更快、更彻底。其它操作步骤不变。
结果
用上述新方法(处理)和原法(对照)共测定163例Met Hb还原率,分为男半合子组(10例),女杂合子组(25例),男正常组(68名)和女正常组(60名)。新方法的Met Hb还原率都比原法低,酶活性越低的组,下降的幅度越大,男半合子组(酶显著缺乏组)和杂合子组(酶中度缺乏组)分别下降48.9%和36.9%。酶显著缺乏组中被误为中度缺乏的3例得到纠正。特别是杂合子组,用原法,25例中只检出7例,用新法可从25例中检出22例。男、女正常组分别下降11.5%和8.7%,只在128名正常者中检出10例酶中度缺乏者。
讨论
红细胞内有两种Met Hb还原酶,一种是辅酶Ⅱ依赖性Met Hb还原酶,在美蓝存在时,它依赖G6PD产生的还原型辅酶Ⅱ来还原Met Hb,由它还原的Met Hb与G6PD的活性相关;另一种是辅酶Ⅰ依赖性Met Hb还原酶(现称NADH细胞色素b5还原酶),它是依赖糖酵解通路中产生的还原型辅酶Ⅰ来还原Met Hb,其还原过程与G6PD活性无关,而且速度很缓慢。但是,杂合子的Met Hb还原率与正常值的差距不大,如再加上这些无关性的Met Hb还原,就很可能使其Met Hb还原率落入正常范围,造成假阴性。男性半合子和女性纯合子(均属酶活性显著缺乏)的还原率与正常值的差距很大,因此不会产生明显的影响。碘乙酸可抑制糖酵解通路上甘油醛-3-磷酸脱氢酶的活性,从而抑制辅酶Ⅰ的生成,消除与G6PD活性无关的Met Hb还原,提高杂合子的检出率。
值得注意的是,G6PD缺乏杂合子的检出率还受其它因素的影响,如杂合子是由酶活性正常与酶活性缺乏两种红细胞组成的嵌合体,由于两条X染色体随机灭活,两种细胞的比例因人而异;再有,G6PD的变异型不同,酶活性降低的程度也不同。因此,单靠酶活性检测不能将所有的G6PD缺乏杂合子检出,有些必须做基因分析才能检出。
参 考 文 献
1罗建明,梁徐,龙桂芳,等.红细胞平均血红蛋白浓度对高铁血红蛋白还原试验的影响.中华血液学杂志,1992,13:547-548.
(收稿:1998-02-23修回:1998-05-18)
(校对:徐丽娟)
