目前国内、国外常用的塑料包埋剂应用于血细胞免疫组化检测时受到限制，因为乙二醇甲基丙烯酸酯(GMA)等塑料包埋剂于室温下聚合时不仅强烈放热，且可与蛋白质氨基终端结合而遮蔽了细胞表面之抗原决定簇，从而抑制了抗原-抗体反应^［1］。我们采用一种简易骨髓活检塑料块GMA冷包埋技术，使包埋过程控制在低温-低氧环境下进行聚合，防止了热损伤的发生，使塑料包埋切片上也能有效进行免疫酶标反应的检测。

材料和方法

1取材与处理收集治疗前的骨髓增生异常综合征(MDS)6例，包括难治性贫血(RA)5例，RAEB1例；取得缓解的急性髓细胞白血病(AML)M₂ 2例，M₃1例，缓解期多发性骨髓瘤1例。取得骨髓活检组织块应有(2～3)mm×(10～15)mm大小。

2改良GMA包埋剂配制

2.1甲液：将本室Hemapun 865原配方^［2］中的聚乙二醇以2-丁氧乙醇替代，充分摇匀，全溶后置棕色玻璃瓶内4℃保存备用。

2.2乙液：聚乙二醇(PEG)-400 10ml，N-N二甲基苯甲胺0.8ml。全包埋液配制：甲液45份加乙液1份。

3切片操作步骤骨髓活检块放入4℃Bouin液小瓶中置冰箱内，不停摇动固定1小时。以冷0.1mol/L二甲胂酸钠缓冲液(pH7.4)于4℃冰箱内漂洗30分钟，继而经4℃等级乙醇递增脱水，每次10分钟。活检块移置于盛有甲液的模具底部，置4℃真空装置下浸泡2～4小时，取出包埋模具滴加乙液2～3滴而成全包埋液，再放入真空装置4℃下聚合过夜。包埋块经修整后切割成3～4μm厚之切片，冷水浴中装片，常规贴片。

4切片免疫组化染色用APAAP法，一抗为血型糖蛋白A鼠单抗(DaKo)，二抗为碱性磷酸酶结合的免疫鼠IgG，三抗为APAAP酶标复合物。3者均于湿盒内室温下孵育30分钟，滴加碱性磷酸酶底物显色液20μl后37℃下孵育显色20分钟，自来水洗后Mayer苏木素复染胞核4分钟，水洗，甘油明胶封片后镜检。对照切片用正常AB血清替代一抗进行相应染色。

结果

我们以改良简易不脱钙骨髓活检块GMA冷包埋技术效果良好，模块内部无气泡与洞穴形成，可于普通轮转式切片机下获取优质半薄切片，易为一般骨髓病理实验室中常规采用。

由于经我们改良的GMA包埋剂中以2-丁氧乙醇替代传统的聚乙二醇，故包埋剂内含酸量低，消除了过去背景着色的缺点。我们进而证明骨髓块于4℃ bouin液中固定不仅能产生最佳的核与胞浆形态，也能显示优良的免疫组化反应，切片中粒系、巨核系、红系和淋巴系细胞分化抗原定位与显色优良。

我们以APAAP免疫酶法，检测血型糖蛋白抗原在恶性血液病患者10例骨髓塑料包埋切片中红系细胞的分布，证明在所有标本中幼红细胞核周均染成环状或模糊状玫瑰或深红色阳性反应。

讨论

过去本室所用水溶性GMA包埋剂是于室温下聚合，故反应期间强烈放热，不仅损伤了骨髓组织构型，也使骨髓细胞中的各类酶活性以及众多已分化的髓性和淋巴性抗原遭破坏。为此，我们采用一种简便易行的、将包埋过程控制在低温-低氧环境下进行聚合的“制冷系统”，在操作中使用冷却的Bouin液固定，冷的磷酸缓冲液漂洗，冷的各级乙醇脱水，继而置于真空器具中于4℃下缓慢聚合，有效防止了热损伤的发生，从而可同时在同一活检块切片上同时进行常规染色，组化染色和免疫酶标染色3者的联检，进一步提高了骨髓活检塑料包埋在血液病临床应用中的价值。

正常人骨髓切片中的幼红细胞岛(簇)主要定位于小梁间区。MDS时骨髓切片内的红系病态造血表现之一是可检出处于同一发育阶段的幼红细胞岛^［3］。如果簇内以中、晚幼红细胞为主，就易与淋巴细胞集簇相混淆。已知，骨髓切片中的淋巴细胞属较难识别的细胞，它既可单个散在分布于造血基质与脂肪细胞之间，也可聚集形成淋巴小结或淋巴集簇。据记载^［2］，切片内的淋巴样集簇可有以下4种构形：①生发中心小结；②境界清晰之小结；③边缘不规则小结；④小型淋巴细胞集簇。这些构形在切片内极易与中、晚幼红细胞岛相混淆。这时，必须进行免疫组织学的处理。结果证明，骨髓塑料包埋切片内血型糖蛋白相关抗原的免疫酶标检测有助于同一切片内幼红细胞岛与淋巴细胞集簇间的鉴别。进而对MDS、慢性淋巴细胞白血病、淋巴细胞性淋巴瘤或其它低度恶性非霍奇金淋巴瘤病例骨髓切片内这两种细胞簇的识别提供有益资料。

另外，我们还发现此改良冷包埋法对巨核细胞的膜标志抗原(CD₄₁)检测效果极佳，这对我们在骨髓病理切片中提高微小巨核细胞的检出率很有帮助。

参 考 文 献

1Casey TT,Cousar J,Collins R.A simplified plastic embedding and immunohistologic technique for immunophenotypic analyins of human hematopoietic and lymphoid tissues.Am J Pathol,1988,13:183-189.

2浦权主编.骨髓活检病理学.哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1993.14-15.

3浦权,浦杰编著.骨髓增生异常综合征的基础与临床.上海：上海科学技术文献出版社，1996.43-45.

(收稿：1996-11-25修回：1997-05-23)

(校对：张吉贤)