hPV16-E6 protein in esophageal cancer



zou SY, Liu XM, Tang XP, Wang P

Immunohistochemical and electron microscopic observation on

positive HPV16-E6 protein in esophagealcancer

zOU Sai-Ying, LIU Xu-Ming, TANG Xin-Ping and WANG Ping

department Pathology, Chinese PLA Urumqi General Hospital of

lanzhou Command Area, Urumqi 830000, Xinjiang Autonomous

region, China

Subject headings oncogene proteins, viral/metabolism; esophageal

neoplasms/metabolism; carcinoma, squamous cell/metabolism; esophageal

neoplasms/ultrastructure; carcinoma, squamous cell/ultrastructure

Abstract

AIM To study the expression of HPV16-E6 protein and ultrastructure

in human esophageal cancer.

mETHODS By using immunohistochemical method, 45 patients with

positive HPV16-E6 protein were studied and microscopic observation was made.

rESULTS Nuclear HPV16-E6 protein was present in 45 (84.9%) cases

of esophageal squamous cell cancer specimens in HPV DNA positive patients

by immunohistochemical method. Under the electron microscope, the inter- and

peri-chromatin granules as well as nuclear bodies were increased in the nuclei in

all biopsies with positive HPV16-E6 protein, but no HPV particle was found in

cancer cells.

cONCLUSION HPV16DNA-E6 was integrated into the cellular genome.

the E6 early genes of HPV16DNA were closely related to the inter- and

peri-chromatin granules as well as nuclear bodies hyperplasia in the nuclei

of esophageal cancer.

主题词 癌基因蛋白质类，病毒性/代谢；食管肿瘤/超微结构；食管肿瘤/代谢；癌，鳞状细胞/超微结构；癌，鳞状细胞/代谢

中国图书资料分类号 R 735.1

摘 要目的 观察人乳头瘤病毒(HPV)E6癌基因蛋白阳性食管鳞癌的超微结构特性，探讨食管鳞状细胞癌与E6癌基因蛋白的关系。

方法 采用微波免疫组化技术，对53例食管鳞癌HPV阳性病例进行HPVE6蛋白检测，同时进行电镜观察.

结果 45例阳性的食管鳞癌中，高分化鳞癌2例(4.4%)，中分化鳞癌18例(40.0%)，低分化鳞癌25例(55.6%). 电镜观察：HPV阳性的食管鳞癌主要呈低度分化.除显示核质比例增加，核外形不规则以外，核小体及染色质间、染色质周围颗粒显著增加。

超微结构中未见病毒颗粒.

结论 食管鳞状细胞癌中HPVE6蛋白与食管癌细胞的异常增生、代谢旺盛有一定的关系。

0 引言

在近年乳头瘤病毒与人类鳞状细胞癌的研究中，高危HPV-16/18-DNA的早期转化基因E6蛋白与鳞癌的密切关系已开始得到证明^［1，2］，食管鳞状细胞癌中HPVE6的表达及超微结构变化尚未见报道. 我们采用免疫组化技术，对53例经多重PCR检测人乳头瘤病毒阳性的食管鳞癌标本进行HPVE6蛋白检测，同时进行电镜观察，结合资料特点予以探讨分析。

1 对象和方法

1.1 对象 HPV阳性食管鳞癌53例，将手术切除的食管鳞状细胞癌标本肿瘤区域组织10%福尔马林固定，常规石蜡切片2张，一张HE染色，病理诊断分型.另一张进行免疫组化E6蛋白检测.

1.2 方法 ①免疫组化检测：使用浙江产YWY781型医用微波炉.先进行抗原修复，然后进行微波ABC免疫组化法.光镜观察：以胞核内出现棕黄色颗粒计为阳性，设正常胎儿食管粘膜和非癌食管组织为阴性对照.②电镜观察：食管鳞癌标本经3.75%戊二醛及1%锇酸双重固定，梯度丙酮脱水，低粘度包埋剂浸透并包埋。半薄切片定位于鳞状细胞癌组织，超薄切片经铅铀双重染色，用JEM-1010电镜观察。

2 结果

多重引物PCR检测HPV阳性的53例食管鳞癌中，HPVE6癌基因蛋白免疫组化检测阳性45例，其中高分化鳞癌2例(4.4%)，中分化鳞癌18例(40.0%)，低分化鳞癌25例(55.6%)；其表达特征为：阳性颗粒位于胞核内，呈点灶状或片状、全层性分布，以低分化鳞癌的表达强度最高.正常胎儿和非癌食管鳞状上皮呈阴性。

食管鳞癌的电镜样品10例中，HPVE6阳性6例，电镜观察：癌巢外层的基底膜基本消失，细胞间隙变窄，部分出现微突及绒毛样结构并出现假腺腔；桥粒明显减少甚至消失.胞浆内张力原纤维束减少，杂乱排列，偶见桥粒；游离核糖体及糖元颗粒呈片状湖状区域性分布；滑面内质网及粗面内质网或明显减少或明显增多，分布不均匀；线粒体较少者胞浆呈空泡状，多者则呈明显畸形、拥挤肿胀状态.胞核增大，畸形、核突起明显增多，核浆比例明显失调；常染色质及异染色质增多、分布异常；核小体及染色质间、染色质周围颗粒增多；核仁增多、增大，常见核内包含体. 核内未见到病毒颗粒；间质内淋巴细胞及浆细胞浸润显著。

3 讨论

人乳头瘤病毒是一种具有异质性的致瘤病毒，在高危HPV16/18DNA读码框架早期区列的亚基因片段中，E6属于早期转化基因，编码一种158个氨基酸的核蛋白。

近年的研究证实，HPV16及18E6基因所编码的E6蛋白属于肿瘤早期特异转化蛋白，是具有生物活性的病毒癌蛋白，表达于与HPV有关的癌细胞中；88.9%的HPV-16DNA阳性宫颈癌病例中可以检出E6基因. 在HPV-16导致宫颈癌的过程 中，E6基因多位点整合在宿主细胞基因组DNA上，始终完整保留并活跃转录，从而构成宫颈鳞状细胞转化为癌的关键因素^［1-3］. 本组资料检测结果表明在HPV阳性的食管鳞癌标本中，HPVE6有明显的表达，HPVE6基因存在于食管鳞癌细胞核内，进行转录编码，生成E6蛋白表达，并参与食管鳞癌的发生发展过程.

我们在HPVE6蛋白阳性的食管鳞癌电镜观察中，未查见病毒颗粒，其主要的超微结构变化为核常染色质明显增多，核内小体及染色质间、染色质周围颗粒增多等核物质代谢旺盛的表现；核内小体的出现在HPV16DNAE6阳性表达者中多见，二者呈正相关的关系；各细胞器的变化表现为低分化鳞癌的特征. 提示HPV16感染宿主的鳞状细胞后，E6基因在核内整合、复制，从而干扰细胞的正常代谢，核物质异常增殖，导致细胞发生恶性转化，尤其与低分化鳞癌的发生发展可能有密切的关系，有待于深入研究。

邹赛英，女，1954-06-30生，陕西人，汉族. 1983年兰州军区高等医学专科学校乌鲁木齐分校医疗大专毕业，副主任医师，从事肿瘤病理的诊断及研究，发表论文30篇，获军队优秀科技成果三等奖一项，四等奖三项.

通讯作者 邹赛英，830000，乌鲁木齐兰州军区乌鲁木齐总医院病理科，新疆乌鲁木齐友好北路41号.

Correspondence to: ZOU Sai-Ying, department of Pathology, Chinese PLA

urumqi General Hospital of Lanzhou Command Area, 41 Youhao Beilu, Urumqi

830000, Xinjiang Autonomous Region, China

tel. +86·991·4842256-376

4 参考文献

1Chang FJ, Syrianen S, Shen Q, Ji HX, Syrjianen k. Human papilloma virus (HPV) DNA in the esophageal precancer lesions and squamous cell carcinomas

from China. Int J Cancer, 1990;45(1):21-25

2Si JY, Lee K, Han R, Zhang W, Tan BB, Song GX et al. A research for the

relationship between human papillomavirus and human uterine cervical carcinoma.

i. The identification of viral genome and subgenomic sequences in biopsies of

chinese patients. J Cancer Res Clin Oncol, 1991;117(5):454-459

3司静懿，李昆.宫颈癌病毒病因癌变原