我们动态观察了平阳霉素(Blemycin A₅)致肺纤维化过程中肺胶原纤维的含量以及肺间质中Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维和泡沫细胞出现的时相及分布。

材料与方法雄性健康的SD大鼠36只。实验分为4组，分别为：注平阳霉素后7天组、14天组、70天组(简称7天组、14天组、70天组)和假手术组(sham)。每组均为9只，测定其中6只肺组织羟脯氨酸；其余3只进行形态学观察。以平阳霉素(5 mg/kg)气管内注入的方法复制大鼠肺纤维化模型；假手术组大鼠用等量(0.9%)生理盐水代替平阳霉素，于注生理盐水后21天取材。化学比色法^［1］测定肺组织羟脯氨酸含量。肺组织常规固定、脱水、石蜡包埋、切片(厚6 μm)。参照文献［2，3］进行肺组织切片苦味酸天狼猩红染色并在偏振光显微镜(Olypus)下，观察肺间质中Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的分布。肺组织切片HE染色，在普通显微镜下观察肺间质中泡沫细胞的分布。统计学处理采用t检验，数据用±s表示，P＜0.05为差异有显著性标准。

结果(1)气管内注平阳霉素后不同时间肺组织羟脯氨酸含量的变化：与假手术组大鼠肺组织羟脯氨酸含量［(2.8±0.8) mg/kg］比，7天组大鼠肺组织羟脯氨酸含量［(3.8±0.8) mg/g］的变化无统计学意义(P＞0.05)；14天组大鼠肺组织羟脯氨酸含量［(4.7±1.2) mg/g］明显增高(P＜0.05)；70天组大鼠肺组织羟脯氨酸含量［(9.7±2.3) mg/g］进一步增高(P＜0.01)。(2)肺纤维化形成过程中泡沫细胞的分布规律：假手术组大鼠肺间质中未见泡沫细胞(图1)。7天组大鼠肺泡间隔增宽，部分肺泡腔内充满渗出物、形成灶性实变区，在实变区可见泡沫细胞和其他炎症细胞，但以泡沫细胞为主(图2，3)。14天组大鼠泡沫细胞间出现大量的纤维母细胞(图4)。70天组大鼠肺组织部分区域的肺泡萎缩，几乎所有肺泡间隔都增宽，在增宽的肺泡间隔内有大量的泡沫细胞(图5)。(3)肺纤维化形成过程中Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的分布规律：假手术组大鼠肺间质中仅在肺泡间隔分布着少量纤细的Ⅲ型胶原纤维。7天组大鼠肺间质Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维与假手术组大鼠比无明显差异。14天组，大鼠肺间质中纤细的Ⅲ型胶原纤维增多；黄绿色、黄色及桔红色的Ⅰ型胶原纤维亦增多，但以Ⅲ型胶原纤维增多为主。70天组大鼠肺组织纤维化程度明显加重，肺泡腔萎缩，肺泡间隔中粗大的黄色、桔红色的Ⅰ型胶原纤维明显增多，Ⅰ型胶原纤维间及边缘掺杂着Ⅲ型胶原纤维。Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的分布区域与大量泡沫细胞的存在区域一致(图6)。

图1假手术组大鼠肺，示肺泡间隔中无泡沫细胞HE染色×400

图2注平阳霉素后7天鼠肺，示肺泡间隔增宽，部分肺泡腔内充满渗出物形成实变区，实变区内有大量泡沫细胞HE染色×100

图3示图1中的泡沫细胞HE染色×400

图4注平阳霉素后14天鼠肺，示泡沫细胞及其间的纤维母细胞HE染色×200

图5注平阳霉素后70天纤维化鼠肺，示肺泡萎缩，肺泡间隔增宽，其间大量的泡沫细胞HE染色×100

图6注平阳霉素后70天纤维化鼠肺，示肺泡间隔中的Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维，Ⅰ型胶原纤维为黄红色，Ⅲ型胶原纤维为绿色天狼猩红染色×100

讨论从肺组织羟脯氨酸的测定结果可知，气管内注平阳霉素后肺组织胶原纤维含量增多，肺纤维化程度不断加重。本实验结果显示，泡沫细胞出现在Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的增多之前，并且在整个肺纤维化形成的过程中，肺泡间隔内始终有大量的泡沫细胞存在。虽然在肺纤维化形成初期肺内除泡沫细胞外还有其他炎症细胞，但以大量的泡沫细胞为主，并且泡沫细胞与Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的分布区域一致，由此推测泡沫细胞在肺纤维化形成中可能起一定的作用。

志谢在本实验完成过程中，河北医科大学基础医学院病理解剖教研室刘庆银副主任技师在切片制作方面给予大力指导和帮助；张香宏教授、段惠军教授给予大力支持和无偿援助，特致谢。

参考文献

1Jamall IS, Finelli VN, Que Hee SS. A simple method to determine nanogram levels of 4-hydroxyproline in biological tissues. Anal Biochem, 1981,112:70-75.

2张晶，何静雯，王泰龄，等.苦味酸天狼猩红偏振光法鉴别Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维.中华病理学杂志，1996，25：180-181.

3陈宁蒙，陈丹，王彤海，等.苦味酸天狼猩红和偏振光法对实验性矽肺胶原纤维的研究.中华病理学杂志，1993，22：53-54.

(收稿：1998-12-30修回：1999-06-17)