材料(1)我院临床送检的痰标本。(2)临床分离培养的结核分支杆菌纯培养物。经常规方法鉴定。(3)模拟的抗酸杆菌阳性标本:临床诊断为肺炎、支气管炎等非结核分支杆菌感染患者的痰(经抗酸染色检查为阴性)与不同浓度的卡介苗悬液充分混合后,制成不同浓度的阳性模拟标本。(4)试剂:20 g/L甲醛次氯酸钠溶液。
方法(1)结核分支杆菌培养:标本经40 g/L硫酸溶液处理后接种于改良罗氏培养基观察4~8周,温度37℃。(2)甲醛次氯酸钠处理集菌法:取24小时痰标本3~5 ml,放入玻璃瓶中,加等量20 g/L甲醛次氯酸钠溶液,瓶口压玻璃纸加塞,振荡摇匀,静置10分钟,取下瓶塞及玻璃纸,加入二甲苯1 ml加塞,振荡混匀,加自来水至瓶口而不外溢,将已编号的玻璃片平放于瓶口上约10分钟,使悬浮于瓶口的含菌油膜全部吸附于玻片上,取下烘干后行抗酸染色镜检。
(3)普通处理集菌法:取24小时痰标本3~5 ml,加1 g/L氢氧化钠溶液20 ml,放高压蒸汽锅内,经15磅20~25分钟,取出放冷后加二甲苯(以下步骤同甲醛次氯酸钠处理集菌法)。(4)结果判定:按《诊断细菌学》[1]标准判定。
结果(1)两种检查方法的评价:共检测100份模拟样本,其中阴性50份,不同浓度模似阳性样本50份,将阴性和阳性样本随机混合,每份样本分别用两种方法检查。结果50份阴性样本,两种方法检查均阴性;阳性样本中,两种方法检查均常见(++)和(+++),而甲醛次氯酸钠处理法(+++)较多,菌体显示大而清晰。对两种方法的检查结果进行配对卡方检验,P>0.05,说明无显著性差异。同样的结果在对我院500份临床送检标本的检查中得以印证。(2)消毒效果:用15份(++)以上的临床痰标本和15份加结核分支杆菌纯培养物的模拟痰标本进行检测,对用20 g/L甲醛次氯酸钠溶液消毒处理10分钟(消毒后以10 g/L氨水处理)前后的标本分别进行结核分支杆菌培养,结果30份标本,处理前均培养出结核分支杆菌,消毒处理后均无结核分支杆菌生长,说明用20 g/L甲醛次氯酸钠溶液消毒10分钟效果完全可靠。(3)灵敏性:将卡介苗研磨均匀,制成不同浓度的样本,其结核分支杆菌浓度分别为2×103/ml、1.5×103/ml、10×103/ml、0.5×103/ml、0.3×103/ml、0.1×103/ml。用两种处理方法对各样本进行检测,结果普通处理集菌法在1.0×103/ml以上时才可见(+),而甲醛次氯酸钠处理集菌法在0.5×103/ml时即可见(+),说明用20 g/L甲醛次氯酸钠溶液使痰标本液化的效果优于氢氧化钠和氨水。
讨论普通集菌法在处理痰标本时,液化后均采用高压消毒法或紫外线照射消毒法,前者繁琐且费时,后者消毒效果不理想,需时更长。甲醛次氯酸钠处理集菌法将液化和消毒合并为一步进行,不仅消毒效果可靠,灵敏性较高,且较普通集菌法快速;不仅可在大的医院实验室进行,在基层实验室也便于推广,简便而省时,不失为检测抗酸杆菌较理想的方法。
参考文献
1李仲兴,郑家齐,李家宏,等编.诊断细菌学. 香港:黄河文化出版社,1992.
(收稿:1998-10-16修回:1999-03-15)
