关键词： 一氧化碳；哮喘；儿童

【摘要】目的探讨一氧化碳(CO)等在小儿哮喘发病机制中的作用及意义。方法应用Chalmers血红蛋白结合及联二亚硫酸盐还原法检测了22名正常儿童、26例支气管哮喘患儿血浆CO水平，同时测定了一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平，并在动物模型上进行验证。结果哮喘患儿急性发作期血浆CO、和TNF-α水平与对照组比较，t值分别为8.421，3.088，15.432，(P均＜0.01)，缓解期CO和水平恢复正常(P均＞0.05)，而TNF-α水平与对照组比较差异有显著性(P＜0.01)。哮喘患儿血浆CO与水平呈显著正相关(r=0.476，P＜0.05)，而与TNF-α相关不显著(r=0.268，P＞0.05)。过敏性哮喘豚鼠血浆CO和TNF-α水平与对照组比较，t值分别为3.694，7.454，(P均＜0.01)，而水平变化差异无显著性(P＞0.05)。过敏性哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中CO、和TNF-α水平的t值分别为3.049，5.609，5.955，(P＜0.05～0.01)。糖皮质激素组血浆及BALF中CO、和TNF-α水平差异均无显著性(P＞0.05)。过敏性哮喘豚鼠BALF中CO水平与水平呈显著正相关(r=0.897，P＜0.05)，而与TNF-α水平相关不显著(r=0.625，P＞0.05)。结论内源性CO是在NO之外的又一个内源性介质参与哮喘的一系列病理生理过程，其生物学作用及其临床价值尚需进一步探讨。

Evidence of increased endogenous carbon monoxide production in asthma

JIANG Dongbo, SHI Yuan, LI Huaqiang, et al.Institute of Surgery, Daping Hospital, Third Military Medical University of PLA, Chongqing 400042

【Abstract】ObjectiveTo investigate the role of carbon monoxide (CO) in the pathogenesis of asthma.MethodsWe examined CO, nitrite and nitrate () and tumor necrosis factor alpha (TNF-α) levels in plasma of 26 asthmatic children and 22 matched normal children. At the same time, we examined the plasma and bronchoalveolar lavage fluid (BALF) CO, and TNF-α levels in guinea-pigs with allergic asthma.ResultsAsthmatic children in acute attack stage had increased levels of CO, and TNF-α in plasma compared with normal control subjects (all P＜0.01), while in stable stage plasma CO and reduced to normal levels (both of the P＞0.05), but TNF-α was still higher than the normal controls (P＜0.01). Guinea-pigs with allergic asthma had increased amounts of CO and TNF-α in plasma and CO, and TNF-α in BALF as compared with normal control subjects (P＜0.05～0.01), but no changes in levels of circulating (P＞0.05) were found. There was no difference between glucocorticoid treated asthmatic guinea pigs and normal controls in levels of CO, , and TNF-α. The elevation of plasma CO correlated with elevated level in asthmatic children (P＜0.05), so did in the BALF in allergic guinea-pigs.ConclusionsOur present data showed that endogenously produced CO was increased during the course of asthma, which suggested that the role of CO in asthma might worth further study.

【Key words】Carbon monoxideAsthmaChildren

自90年代以来，有关一氧化碳(CO)的生物学研究取得了重要进展。目前研究提示，与一氧化氮(NO)分子结构类似的CO不仅作为一种信使分子发挥重要作用，而且是又一种神经递质^［1］。它具有调节平滑肌舒张，调节血流、血压，细胞内环磷酸鸟苷(cGMP)水平、细胞因子水平、NO水平、体内激素分泌，细胞及组织损伤和肿瘤免疫等复杂功能^［1-4］。所有迹象表明CO和NO一样，具有重要的生理和病理学意义。目前已成为心血管、免疫和神经科学等医学领域的一个研究热点。推测CO在支气管哮喘发病机制中可能具有重要意义。为此，我们检测了正常儿童、支气管哮喘患儿血浆CO、NO和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平，并在动物模型上进行验证，以探讨CO等在小儿哮喘发病机制中的作用及意义，为哮喘发病机制的研究提供新的研究途径。

对象与方法

一、临床研究

1.正常对照组：正常健康体检儿童22名，年龄2～10岁，男13名，女9名。既往均无哮喘病史，且采血前4周内无感染及用药史。

2.哮喘组：确诊为支气管哮喘的本院住院及门诊患儿26例，均为急性发作期患儿，男16例，女10例，年龄1～13岁。采血前4周内未口服及静脉滴注糖皮质激素及免疫增强或抑制剂等药物。其中16例患儿经糖皮质激素及支气管扩张剂等治疗，待临床症状缓解后，于出院前再次采周围静脉血待测。

二、动物实验研究

体重为200～250 g的健康豚鼠20只，雌雄各半，随机分为3组，每组5只。

1.哮喘组：用10%卵白蛋白腹腔注射1.0 ml将动物致敏，2周后用1%卵白蛋白超声雾化吸入致其哮喘发作，出现喘息，呼吸困难和青紫等。隔日诱喘1次，共10次，末次后于15分钟内采心脏血标本并处死动物，摘取其肺脏行支气管肺泡灌洗，即由气管内缓慢注入0.9%生理盐水2 ml，保留30秒后抽出，重复4次。每例收集支气管肺泡灌洗液(BALF)6～7 ml，置4℃离心后，取上清液待测。

2.肾上腺皮质激素预防(激素)组：诱喘及操作方法同哮喘组，在每次诱喘前腹腔注射氢化可的松0.5 mg/100 g。

3.正常对照组：用生理盐水代替诱喘剂。

三、方法

1.CO水平测定：采用Chalmers血红蛋白结合及联二亚硫酸盐还原法^［5］。

2.NO水平测定：采用经典的镉还原柱层析和比色法，通过检测浓度以代表NO水平^［6］。

3.TNF-α水平测定：采用L₉₂₉细胞株生物活性法测定^［7］。

四、统计学处理

实验数据以±s表示。组间比较用t检验，并做直线相关分析。

结果

一、哮喘患儿血浆CO、和TNF-α水平

哮喘患儿急性发作期血浆CO、和TNF-α水平均显著升高，与对照组比较差异有非常显著性(t分别=8.421, 3.088, 15.432, P均＜0.01)，缓解期CO和水平恢复正常(P均＞0.05)，而TNF-α水平虽有明显下降，但