一般认为γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)等与肺纤维化发生发展密切相关^［1，2］。本研究目的是探讨IFN-γ和吲哚美辛(Indo)对肺纤维化的影响及其作用机制。

材料与方法(1)试剂与配制：博莱霉素(BLM)(天津河北制药厂)和IFN-γ(上海克隆生物高技术有限公司)使用前用生理盐水溶解。Indo粉剂(蚌埠市第二制药厂)50 mg，溶解于5.6%碳酸氢钠溶液中，调整pH至7.0～7.2，加水至200 ml；然后用孔径0.22 μm的滤膜抽滤除菌，分装备用。TGF-β₁免疫组化和TNF-α酶联免疫吸附试验试剂盒分别购于福州迈新公司和北京邦定生物医学公司。(2)肺纤维化模型的复制与分组：取(16～20) g体重的ICR小白鼠(医科院上海动物研究所)，按陈祥银等^［3］报道的方法复制成肺纤维化的动物模型。即动物麻醉后，取仰卧位，切开颈部皮肤，分离气管，插入4号针头；用微量注射器缓慢注入BLM溶液50 μl(含BLM 0.1 mg)，缝合皮肤后，将动物随机分为三组，每组8只；BLM组：腹腔内注射生理盐水，IFN-γ组：肌肉注射IFN-γ 3×10⁴ U/kg，和Indo组：腹腔内注射Indo 1 μg/g；三组均每周连续注射5天。另取8只正常小白鼠作为对照。(3)观察指标与测定方法：在BLM注射后第30天，测量体重。颈动脉取血0.5 ml，离心沉淀取血清，于-85℃下保存。然后颈动脉放血处死小白鼠。分离出肺组织，称取湿重后，用福尔马林固定，分别作H-E和Masson氏染色，按Szapiel等^［4］方法作病理形态学分析。用S-P免疫组化法测定鼠肺TGF-β₁的表达，用双抗体夹心酶联免疫吸附试验测定血清TNF-α含量。(4)统计学处理：采用t、秩和、χ²检验。

结果(1)病理学改变：Indo组、BLM、IFN-υ组，对照组肺系数分别为13.7±4.9，9.4±2.6，6.5±0.7，6.1±1.1；前两组显著大于后两组(P＜0.01)。肺病理组织学改变以Indo组最重，BLM组次之，IFN-γ组介于BLM组和对照组之间；卡方检验示组间差异有显著性(χ²=7.66,P＜0.05)。(2)血清TNF-α改变：Indo组、BLM组、IFN-γ组和对照组TNF-α浓度的几何均数分别为1995、741、347和229 ng/L。秩和检验H值为7.81，组间差异有显著性；前三组均较对照组明显增高，Indo组又显著高于IFN-γ组(P均＜0.05)。(3)TGF-β蛋白表达：Indo组、BLM组、和IFN-γ组炎症区多数鼠肺无TGF-β蛋白表达。Indo组、BLM组和IFN-γ组分别有7例,4例和2例肺纤维化区TGF-β₁表达在10～20个细胞/高倍视野，组间差异有显著性(χ²=6.38，P＜0.05)。

讨论最近研究证实，TNF-α和TGF-β等是肺纤维化的重要调节因子^［1，2］。IFN-γ相对缺乏可能与纤维母细胞的激活、胶原沉积和疤痕形成等有关。Gurujeyalashmi等^［1］研究发现IFN-γ能明显降低BLM引起的TGF-β、前胶原纤维-αⅠ和αⅢ mRNA以及羟脯氨酸的增加程度。我们亦发现IFN-γ能明显抑制BLM引起的肺系数增加和病理改变，并伴有纤维化区TGF-β₁表达程度的下降，提示IFN-γ是通过下调TGF-β₁表达来发挥作用的。既往研究证实花生四烯酸代谢产物参与肺部炎症、损伤和纤维化的发生。野村将春等^［2］发现腹腔注射PGE₁能明显抑制BLM引起的肺系数增加和肺纤维化的形成；作为花生四烯酸代谢途径的重要抑制剂，Indo妨碍PGE的合成，可能会加重BLM引起的肺间质性炎症和纤维化。我们发现Indo组肺系数较BLM组明显增加，病理改变亦明显加重，并伴有血清TNF-α浓度和肺纤维化区TGF-β₁ 表达的增加；提示Indo加重肺间质炎症和纤维化除与PGE合成减少有关外，尚可能与细胞因子TNF-α和TGF-β₁合成与分泌增加有关。

参考文献

1Gurujeyalashmi G, Giri SN.Molecular mechanisms of antifibrotic effect of interferon gamma in bleomycin-mouse model of lung fibrosis: downregulation of TGF-beta and procollagen I and III gene expression. Exp Lung Res，1995，21:791-808.

2野村将春,安朴正安,藤村政树,他.マウスのブレオマイシン肺脏炎モデルにぉけるPGE₁投与に关する检讨.日本胸部疾患学会会，1995，33(增刊):232.

3陈祥银,严仪昭,曾卫东，等. 丹参, 川芎嗪及糖皮质激素对肺纤维化保护作用的实验观察.中华结核和呼吸杂志，1987，10：152-154.

4Szapiel SV, Elson NA, Fulmer JD, et al. Bleomycin-induced interstitial pulmonary disease in the nude, athymic mouse. Am Rev Respir Dis，1979，120:893-899.

(收稿：1998-08-31修回：1998-09-22)